[发明专利]一种基于三代测序的FMR1的检测引物、体系及方法

权利要求书

1.一种基于三代测序的FMR1的检测引物，包括：

上游引物FMR1-F3：5'-gcagtcgaacatgtagctgactcaggtcacCCGCGGAATCCCAGAGAGGCC-3'，

下游引物FMR1-R3：5'-tggatcacttgtgcaagcatcacatcgtagGTCACTTAGCGCCGATTTCGGCC-3'。

2.一种基于三代测序的FMR1的检测体系，其特征在于，包括权利要求1所述的一种基于三代测序的FMR1的检测引物。

3.根据权利要求2所述的一种基于三代测序的FMR1的检测体系，其特征在于，还包括PCR扩增增强剂；优选地，所述PCR扩增增强剂包括甘油及DMSO。

4.根据权利要求3所述的一种基于三代测序的FMR1的检测体系，其特征在于，所述PCR扩增增强剂中，甘油的加入量为PCR扩增反应体系总体积的2.5％-5％，DMSO的加入量为PCR扩增反应体系总体积的2.5％-5％。

5.一种基于三代测序的FMR1的检测方法，包括如下具体步骤：

(1)根据人FMR1的DNA序列，跨CGG重复区设计PCR引物；

(2)使用步骤(1)中的引物，加入DNA模板、dNTP、PCR扩增增强剂，配制PCR反应mix，扩增FMR1的CGG高重复区；

(3)使用步骤(2)得到的PCR扩增产物，毛细管电泳质检条带大小；

(4)使用步骤(2)中得到的PCR扩增产物，加Barcoded，进行三代建库及测序；

(5)使用步骤(4)产出的数据，分析出CGG的重复次数。

6.根据权利要求5所述的一种基于三代测序的FMR1的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述引物包括：

上游引物FMR1-F3：5'-gcagtcgaacatgtagctgactcaggtcacCCGCGGAATCCCAGAGAGGCC-3'，

下游引物FMR1-R3：5'-tggatcacttgtgcaagcatcacatcgtagGTCACTTAGCGCCGATTTCGGCC-3'。

7.根据权利要求5所述的一种基于三代测序的FMR1的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增增强剂包括甘油及DMSO，优选地，所述PCR扩增增强剂中，甘油的加入量为PCR扩增反应体系总体积的2.5％-5％，DMSO的加入量为PCR扩增反应体系总体积的2.5％-5％。

8.根据权利要求5所述的一种基于三代测序的FMR1的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，在预冷的冰板上配制PCR反应mix，所述冰板的温度为0-10℃。

9.根据权利要求5所述的一种基于三代测序的FMR1的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，10μL PCR反应体系中，所述DNA模板的加入量为10ng-50ng。

10.根据权利要求5所述的一种基于三代测序的FMR1的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，扩增条件为：98℃预变性3min；98℃变性10sec，56-68℃退火30sec，68℃延伸1min50sec，32个循环；68℃延伸5min；4℃保存。