[发明专利]一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型

说明书

本发明公开了一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型。其制备方法为：1）构建含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体；2）利用步骤1）所述的含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体，制备含有KGF基因启动子的慢病毒溶液，并进一步感染间充质干细胞，筛选稳转株。本发明使用对疾病具有治疗作用的间充质干细胞为模型，以编码间充质干细胞分泌的可溶性因子的KGF基因的启动子为靶点，筛选促进间充质干细胞分泌可溶性因子KGF的潜在药物，为使用药物与间充质干细胞联合治疗急性肺损伤，增强疗效，奠定了基础。

技术领域

本发明涉及用于潜在药物筛选的细胞模型和潜在药物的筛选方法，具体涉及一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型。

背景技术

急性肺损伤（Acute lung injury，ALI）和急性呼吸窘迫综合征（Acuterespiratory distress syndrome，ARDS）是一种危及生命的疾病并且在患者中死亡率极高。ALI 和ADRS的特征主要是肺泡-毛细血管膜屏障损伤，白细胞积聚，肺水肿，炎症细胞渗出以及肺泡出血，从而导致免疫系统和肺泡毛细血管之间产生复杂关系，导致急性促炎反应。

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一种具有自我更新，分化能力的细胞。越来越多的研究发现，MSCs可以分泌可溶性因子，如生长因子、抗炎性因子和抗微生物肽等，从而可以稳定肺部微血管屏障，增强肺泡液体的清除，并可以降低感染。并且MSCs来源广泛，可以从多种组织中分离，如骨髓，脂肪，胎盘等。根据临床前的研究，不同来源的MSCs有着不同的免疫和生物功能。人胎盘绒毛膜来源的MSCs（human chorionicvillus-derived mesenchymal stem cells，hCMSCs）属于胎盘来源的MSCs，被认为是MSCs的替代来源。由于hCMSCs可以分化成三个胚层并且容易获得，因此与其他来源的MSCs相比具有更好的免疫调节功能。

角质细胞形成因子（Keratinocyte Growth Factor，KGF）是成纤维细胞生长因子家族成员之一。KGF被认为是MSCs最重要的旁分泌可溶性因子之一，可以在体内和体外刺激II型肺上皮细胞的增殖，促进II型上皮细胞的修复，从而增强机体对肺损伤的抵抗。KGF可以通过促进表面活性物质合成，改善水肿清除率。另有研究发现，KGF可以减少肺损伤时肺内羟基脯氨酸积聚，抑制胶原mRNA的表达，从而阻止肺纤维化。

高通量药物筛选技术已经成为目前药物筛选领域研究的重要课题，针对靶标的药物研究过程是发现先导化合物的关键，在药物研发过程中起到重要作用。中国专利CN110452880A公开了一种急性肺损伤细胞模型的制备方法及其应用，具体公开了1）将A549细胞置于诱导培养基中进行诱导培养，然后弃去培养基，消化收获细胞；2)将收获的A549细胞用培养基悬浮，置于培养皿中，添加炎性物质刺激激发炎症反应，继续培养12-48小时后，即可用于急性肺损伤的药物筛选。而目前未见如本申请所述的用于急性肺损伤药物筛选的细胞模型。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供了一种用于筛选治疗急性肺损伤潜在药物的靶向KGF启动子的间充质干细胞、其制备方法和用途，以及一种筛选治疗急性肺损伤潜在药物的方法。

在第一方面，所提供的用于筛选治疗急性肺损伤潜在药物的靶向KGF启动子的间充质干细胞，其制备方法为：

1）构建含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体；

2）利用步骤1）所述的含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体，制备含有KGF基因启动子的慢病毒溶液，并进一步感染间充质干细胞，筛选稳转株。

较佳地，所述含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体中插入的KGF基因启动子的序列如SEQ ID NO:3所示。