[发明专利]一种含有CLCN2纯合突变的白质脑病患者特异诱导多能干细胞系

说明书

本发明公开了一种含有CLCN2纯合突变(c.2257CT)的白质脑病患者特异诱导多能干细胞系。收集CLCN2基因突变患者的尿液，分离和培养尿液细胞，尿液细胞重编程为诱导多能干细胞，获得含有CLCN2纯合突变(C.2257CT)的白质脑病患者特异诱导多能干细胞系。该诱导多能干细胞的STR与CLCN2患者的相同，表达多潜能分子标签，体内具有形成畸胎瘤能力，可为CLCN2突变相关疾病的发病机制及治疗研究提供新的生物材料和细胞模型工具。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含有CLCN2纯合突变(c.2257CT)的白质脑病患者特异诱导多能干细胞系极其构建方法。

背景技术

CLCN2基因是编码氯离子通道2(Chloride Channel 2,ClC-2)蛋白的基因。ClC-2在人体中分布广泛，尤其在大脑中表达较高，其在调节水电解质平衡中发挥重要作用[1]。ClC-2在多个器官和组织中发挥功能[2]，其中CLCN2相关白质脑病(CLCN2-relatedleukoencephalopathy,CC2L)是由CLCN2基因突变进而导致ClC-2功能障碍而引起的常染色体隐性遗传病。CC2L患者常表现有视网膜脉络膜病变或视神经萎缩、男性不育、小脑性共济失调、认知障碍、学习障碍等，颅脑MRI通常提示髓鞘空泡变性[3-5]。

在中枢神经系统中，ClC-2主要分布在少突胶质细胞周围的缝隙连接处、海马的锥体神经元中以及血管周围基底的星形胶质细胞末端[1]。有学者认为，ClC-2在神经活动后会通过星形胶质细胞合胞体重吸收Cl-以维持神经元的兴奋性[6]。关于CC2L，目前仅有少量的病例报道，且由于尚无合适的疾病模型，其致病机制尚不明确，目前也无有效的治疗手段。因此，创建用于研究CLCN2基因相关疾病的体外细胞模型是很有必要的。

随着体细胞重编程技术的发展，获取患者特异的诱导多能干细胞(inducedpluripotent stem cells,iPSCs)成为现实[7]。研究表明，iPSCs具有向机体几乎所有细胞分化的能力，不仅可构建多种体外细胞模型进行疾病机制的研究以及药物筛查[8]，还由于其具有患者特异性，可减少免疫排斥的优势，可用于替代移植治疗[9,10]。

因此，构建含有CLCN2突变的白质脑病患者特异诱导多能干细胞系，可以为CLCN2突变相关疾病的发病机制及治疗研究提供新的生物材料。

参考文献：

1、Depienne C,Bugiani M,Dupuits Cetal.Brain white matter oedema due toClC-2chloride channel deficiency:an observational analytical study[J].LancetNeurol,2013,12(7):659-668.

2、Brennan S C,Wilkinson W J,Tseng Hetal.The extracellular calcium-sensing receptor regulates human fetal lung development via CFTR[J].Scientific Reports,2016,6(1).

3、van der Knaap M S,Depienne C,Sedel Fetal.CLCN2-RelatedLeukoencephalopathy[J].2015.

4、Blanz J,Schweizer M,Auberson Metal.Leukoencephalopathy uponDisruption of the Chloride Channel ClC-2[J].Journal of Neuroscience,2007,27(24):6581-6589.