[发明专利]旋毛虫肌幼虫期丝氨酸蛋白酶抑制剂的B细胞表位多肽、杂交瘤细胞株、单克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及免疫学领域，特别涉及旋毛虫肌幼虫期高表达的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ts‑WM5)的B细胞表位多肽、杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用。本发明获得了可以分泌抗Ts‑WM5蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定出其所分泌的单克隆抗体所识别的Ts‑WM5蛋白特异性B细胞表位多肽，对旋毛虫病的诊断具有重要意义，对建立竞争ELISA和循环抗原的检测的夹心ELSIA用于旋毛虫多宿主的检测及亚单位疫苗的研制具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，特别涉及旋毛虫肌幼虫期高表达的丝氨酸蛋白酶抑制剂的B细胞表位多肽、杂交瘤细胞株、单克隆抗体及应用。

背景技术

旋毛虫病是一种危害非常严重的食源性人兽共患寄生虫病，人主要通过生食或半生食含有旋毛虫的肉类引发，猪肉是人类感染的主要来源。该寄生虫不但给畜牧业生产造成巨大的经济损失，而且对人类健康也构成了巨大威胁。鉴于旋毛虫对公共卫生安全造成的极大威胁与危害，世界动物卫生组织(OIE)将旋毛虫病列为屠宰动物强制性检验及首检必检病种。

目前国内外对旋毛虫病的防控策略主要通过对畜禽生产的下游即对屠宰动物进行检验，而检验方法仍为较为落后的镜检及集样消化法，目前我国也在延用这两种方法。然而以上两种方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，其敏感性为肉中虫体密度达到每克3条虫体时方可检出。集样消化法虽可大大提高检出率，将虫体检出率提高至每克肉1条虫体，但该方法仍十分繁琐，在发现阳性样品时仍需对阳性组进行逐头检测。从敏感性的角度来看，由镜检法和集样消化法所造成漏检的肉类均存在安全隐患并可引起人类的感染(摄入75条虫体即可引起人的感染)。由于我国集约化养殖率低、患畜率高以及屠宰量大，从而导致检验压力大且漏检率高。

国内外学者对旋毛虫免疫学检测的方法进行了大量的研究，如间接荧光免疫试验，免疫酶染色试验，免疫印迹试验，免疫吸附试验(ELISA)等，酶联免疫吸附试验(ELISA)是进行旋毛虫感染检测的最常用的免疫学方法，其具有高的敏感性，检测底限可低至每100g肌肉组织中1条幼虫。目前，旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ES抗原是OIE及国际旋毛虫委员会规定的唯一的用于血清学抗体检测的标准抗原。然而ES抗原成分复杂，制备繁琐、生产周期长、批次质量不均和交叉反应等问题，因而阻碍了其实际应用。因此，筛选特异性及敏感性的旋毛虫抗原，利用基因工程技术制备重组抗原，以减小抗原制备难度，建立特异性猪旋毛虫病血清学检测方法已成为国内外众多学者的研究焦点。现代分子生物学技术的发展和应用，筛选并大规模制备质量均匀、性能良好的旋毛虫病诊断抗原成为可能。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种WM5蛋白的B细胞表位多肽、杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用。本发明获得了可以分泌抗Ts-WM5蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定出其所分泌的单克隆抗体所识别的Ts-WM5蛋白特异性B细胞表位多肽，对旋毛虫病的诊断具有重要意义，对建立竞争ELISA和循环抗原的检测的夹心ELISA用于旋毛虫多宿主的检测及亚单位疫苗的研制具有重要的意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了WM5蛋白的B细胞表位多肽，其具有：

(Ⅰ)、如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；或

(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或

(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。