[发明专利]一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析；S2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；S3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体；在重组蛋白制备中采用大肠杆菌表达系统，能很好的保证重组蛋白的表达，表达产量高，有利于大批量的制备特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。

技术领域

本发明涉及生物科学和检测试剂技术领域，具体为一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法。

背景技术

PABPs(poly(A)-binding protein)蛋白家族是一类高度保守的真核RNA结合蛋白。这类蛋白的特征在于特异性识别聚核苷酸序列poly A。Poly A存在于mRNA的3’端，这意味着PABPs可结合几乎所有的mRNA，参与mRNA相关的生物学事件。PABPs可分为七种，分别为：PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L、ePABP、PABPN1和PABPC5。其中PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L为细胞质蛋白，PABPN1为核蛋白，ePABP为胚胎蛋白，PABPC5为X染色体编码蛋白。PABPs家族蛋白功能重要：决定mRNA的尾部长度，协助mRNA运输到胞质，参与mRNA蛋白翻译等。

核蛋白PABPN1蛋白特殊之处在于，它只含有一个RRM(RNA recognition motif，RNA识别模体)。PABPN1L(PABPN1 like,类聚腺苷酸核蛋白1)在人体广泛表达于多个组织脏器，在肾上腺、睾丸、子宫内膜等多组织器官均有高表达(PMID 24309898)，在小鼠则体现为卵巢优势表达(PMID 25409824)。PABPN1L的功能、特殊性值得更进一步的研究，因此，本发明提供的高效的、高特异性的PABPN1L抗体制备方法为相关研究提供重要基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，以解决背景技术中提出的问题。

为实现目的，本发明提供如下技术方案，一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析，通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PABPN1L的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQ ID N0.1所示；

S2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQ IDNO.1所示核昔酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；

S3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。

优选的，步骤S2中PCR扩增的引物序列为SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

优选的，步骤S2中的表达载体为pET-28a(+)。

优选的，大肠杆菌感受态为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。

优选的，步骤S3中重组蛋白PABPN1L抗原免疫的动物为新西兰大白兔、ICR小鼠。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：