[发明专利]一种微生物土壤修复剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种微生物土壤修复剂的制备方法，其特征在于：包括如下工艺步骤：

(1)选取由重金属污染的土壤中分离出的高耐镉菌株QN-3，经扩大培养制成种子液；

(2)在无菌条件下，将种子液按10％的接种量接种于液体发酵培养基中，在28-32℃进行液体种子扩大发酵培养3-5天制成液体菌液；

(3)称取0.05％-0.3％w/v的吐温-20、0.1％-0.5％w/v的黄原胶、1％-5％w/v的甘油、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和硫酸镁，混合均匀后再加入无菌水定容，制得保护剂；

(4)在高耐镉菌株QN-3的液体菌液中按照液体菌液：保护剂的体积比＝0.5-1:1的比例加入保护剂，混匀后制成微生物土壤修复剂，所述微生物土壤修复剂中高耐镉菌株QN-3有效活菌含量不低于2亿个/毫升。

2.根据权利要求1所述的一种微生物土壤修复剂的制备方法，其特征在于：所述高耐镉菌株QN-3的筛选方法为：选取多种重金属污染土壤样品制成土壤悬液，取其上清液均匀涂布到含100mg/L氯化镉的固体PDA培养基，分别挑取单个菌落，采用平板划线分离法将菌落分别种到镉浓度为100、150、200mg/L的固体培养基，然后从中筛选出耐镉性较强的高耐镉菌株，对其单菌落连续4次采用平板划线分离法进行纯化，将纯化所得菌株依次接种到含镉浓度分别为250-24000mg/L的系列浓度梯度的同种筛选培养基上，室温下进行培养，挑选出抗高浓度镉的菌株，得到高耐镉菌株QN-3。。

3.根据权利要求1或2所述的一种微生物土壤修复剂的制备方法，其特征在于：所述高耐镉菌株QN-3于2018年05月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：60378。

4.根据权利要求1所述的一种微生物土壤修复剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中液体培养基为：蛋白胨27-33g，酵母粉9-11g，葡萄糖27-33g，吐温-800.9-1.1mL，柠檬酸三铵1.8-2.2g，七水硫酸镁0.6-0.8g，一水硫酸锰0.045-0.055g，碳酸钙9.0-11.0g；pH调至6.9-7.3。

5.根据权利要求1所述的一种微生物土壤修复剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中保护剂各组分的重量份数为：吐温-20200-240份、黄原胶1-8份、甘油4-10份、磷酸氢二钠0.2-0.8份和磷酸二氢钾和硫酸镁0.1-0.5份，余量为无菌水。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种微生物土壤修复剂制备方法及其应用，其特征在于：所述微生物土壤修复剂应用包括以下应用方法：

A.用旋耕机翻耕镉污染土壤表层厚10-18cm的土壤，保持土壤透气性；

B.加水灌溉保持土壤水分在60％—80％，选择环境温度在10-30℃，做好遮阳措施，将微生物土壤修复剂与水按1：100的质量比进行稀释，将稀释后的微生物土壤修复剂按30-60L/亩的用量均匀喷施到土壤中；

C.放置30天后，重复步骤B的操作进行二次喷药，微生物土壤修复剂的用量和用法均与步骤B相同，再放置30天。

7.根据权利要求6所述的一种微生物土壤修复剂制备方法及其应用，其特征在于：在进行所述步骤A的翻耕之前，先采用网格多点法进行土壤样品采集，然后对所采集的土壤样品的镉含量进行测定。