[发明专利]一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用，涉及生化试剂测定技术领域，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括：磷酸缓冲液、抗坏血酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、亚铁氰化钾、氧化型谷胱甘肽、MgCl₂、FAD、防腐剂和表面活性剂；所述试剂R2包括甘氨酸缓冲液、NADPH、防腐剂和保护剂。通过在试剂中加入EGTA以及二硫苏糖醇能够扩大试剂盒的线性范围、提高试剂盒的稳定性。此外，本发明还提供了上述试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒能够对谷胱甘肽还原酶进行准确测定。

技术领域

本发明涉及生化试剂测定技术领域，具体涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

谷胱甘肽还原酶(GR)是一种利用还原型NAD将氧化型谷胱甘肽(GS-SG)催化反应成还原型(GSH)的酶，具有极其重要的生理功能，广泛的存在于血清、红细胞、单核巨噬细胞、心、肝、肾等组织细胞内，各类肝脏疾病、尿毒症患者全血中GR活性会显著升高，同时组织中的GR会显著降低，检测样品中GR活性可用于辅助判断肝脏与多种疾病。对于肝脏疾病而言，在急性肝炎的早期，血清中谷胱甘肽还原酶的出现比转氨酶更早，和目前急性肝炎的其他检查项目结果进行综合评估可以辅助判断病人的发病时间和发病阶段。同时，谷胱甘肽还原酶的测定还可以辅助鉴别黄疸类型，谷胱甘肽还原酶的检测在诊断黄疸成因时也能与区别是肝前性、肝源性、肝后性黄疸，非肝源性黄疸谷胱甘肽还原酶活性处于正常水平，综合其他检查项目结果进行评估可以辅助判断病人的病因病情。

目前，国内测定谷胱甘肽还原酶的方法主要有Elisa法和紫外酶法，前者需要手工操作，耗时较长、步骤比较繁琐且价格不菲，而后者为目前国内主要推广的方法，但现有的紫外酶法谷胱甘肽还原酶的试剂盒主要为进口干粉试剂，虽然结果准确，但是价格不菲，使用前需用缓冲液和蒸馏水溶解，溶解后的试剂液只能在2～8℃环境下保存两天，使用非常不方便并且复溶后使用不完会出现大量的浪费。而临床生化分析仪上最方便使用的国产液体双试剂目前存在稳定性差，抗干扰能力差等缺点。

中国专利CN108828215B公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：Tris缓冲液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、丙酮酸羧化酶1-5KU/L、抗坏血酸氧化酶1-5KU/L、亚铁氰化钾5-20mg/L、表面活性剂、防腐剂；试剂R2中含有以下成分：Tris缓冲液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、GSSG 2-10mmol/L、NADPH 0.1-0.5mmol/L、稳定剂1-15g/L、防腐剂0.5-2g/L。该试剂盒具有稳定性强以及抗干扰能力强的特点，与此同时，该发明还提供了上述试剂盒的制备方法和应用。但该试剂盒线性范围较小，同时稳定性也相对较弱。

中国专利CN110734952A公开了一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及应用，包括以下组分：第一试剂，包括磷酸盐缓冲液、EDTA-NA2、抗坏血酸氧化酶、高铁氰化钾、防腐剂和氧化型谷胱甘肽；第二试剂，包括三羟甲基胺基甲烷缓冲液、EGTA、防腐剂和还原型辅酶。同时，该发明还公开了上述试剂盒的应用。但该试剂盒稳定性相对较差，抗干扰能力不强。

针对现有的谷胱甘肽还原酶测定试剂盒存在的稳定性差，线性范围小以及抗干扰能力不强等问题，应寻找一种稳定性好、线性范围广、抗干扰能力强的试剂盒，使得该试剂盒能够实现谷胱甘肽还原酶的测定。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒稳定性好、线性范围广、抗干扰能力强，能够实现谷胱甘肽还原酶的准确测定。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：