[发明专利]一种用于检测葡萄败育相关转录因子的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了一种MADS转录因子(MADS5)的单克隆抗体及其应用。本发明的MADS5的单克隆抗体，对MADS5蛋白具有高亲和力和高特异性，能广泛地用于对MADS5检测上，特别可用于检测市售各品种葡萄中MADS5蛋白的表达情况；此外，本发明的单克隆抗体提供了一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同败育品种葡萄中MADS5蛋白的表达与最终葡萄有无核的形成之间的调控关系能够有效地研究。

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种用于检测葡萄败育相关转录因子的单克隆抗体及其应用。

背景技术

MADS-box基因是真核生物中一类重要的转录调控因子，在生长发育调控和信号传导中发挥着重要作用，在动物、植物、真菌中都存在。MADS-box基因在动物中与心肌发育有关；在酵母中起信息素应答作用；在植物中参与花器官的发育，开花时间的调节，在果实、根、茎、叶的发育中都起着重要的作用。MADS-box基因的名称来自酿酒酵母转录因子MCMl、拟南芥花同源异型基因AGAMOUS、金鱼草花同源异型基因DEFICIENS和人血清应答因子SRF4种蛋白的首字母，这4种蛋白质都有一个由56-58个氨基酸组成的高度保守区域称为MADS-box结构域，具有这一结构域的基因都是MADS-box基因，属于MADS-box基因家族。

根据之前的研究发现，在葡萄种子发育过程中，MADS5基因的表达与最终是否形成可繁育的种子之间具有明确的调控关系，即MADS5基因的表达与否，决定了葡萄的败育现象。目前市场中，大量出售的葡萄品种中，一部分是自然选育出来的天然败育品种，一部分是经过人工诱导的无核品种。MADS5基因的高表达促进了种子的形成，而其低表达或不表达引起种子的败育形成天然无核果实。

目前市面上并没有专门针对葡萄MADS5基因的抗体，因此在蛋白检测层面上，对于该研究领域缺乏有效的抗体工具，用于葡萄败育的基础研究，以及市售品种中那些无核品种的葡萄在蛋白层面的检测。

发明内容

本发明提供一种MADS转录因子(MADS5)的单克隆抗体及其应用，以解决现有技术存在的上述缺陷，本发明通过提供一个靶向蛋白研究的工具，使得对市售的不同品种葡萄中的MADS5蛋白的表达变化及蛋白网络图谱可以实现更深层次研究。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

本发明通过合成表达MADS5的全长重组蛋白，氨基酸序列SEQ ID NO.1：MGRGKIEIKRIENTTNRQVTFCKRRNGLLKKAYELSVLCDAEVALIVFSSRGRVYEYSNNNIKSTIDRYKKASSDSTNGGSTMEINAQYYQQESAKLRQQIQMLQNSNRHLMGDSLASLTVKELKQLENRLERGITRIRSKKHELLLAEIEYLQKREIELENESVYLRTKIAEVERLQQANMVSTHEFNAIQALVSRNFFQPNMIEGGSTGYPLPDKKVLHLG，以其作为免疫原，免疫小鼠得到淋巴细胞，并利用杂交瘤细胞融合技术制得融合细胞，经免疫印迹法、有限稀释法和ELISA法，得到能够产出高亲和性和高特异性的单克隆抗体的细胞株，及由该细胞株分泌的单克隆抗体，并经免疫酶联，蛋白印记，免疫共沉淀加质谱和抗体芯片检测等验证，确定最有效抗体。

一种葡萄败育相关蛋白，所述蛋白由MADS5基因表达。

进一步地，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种检测葡萄败育相关蛋白的单克隆抗体。