[发明专利]一种枯草芽孢杆菌在生产抑制真菌物质中的应用

说明书

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌在生产抑制真菌物质中的应用；将枯草芽孢杆菌Bsbc01经活化培养，制得活化菌种；然后经扩大培养，制得发酵种子；再将发酵种子接种于诱导发酵培养基中，经诱导发酵，制得发酵液。本发明首次发现，当发酵培养基中含有胰蛋白胨和大豆蛋白胨经胰蛋白酶和中性蛋白酶分解后的小分子蛋白存在时，可以诱导枯草芽孢杆菌Bsbc01产生抗真菌的抗菌物质，从而使发酵液中富含可以杀灭真菌的代谢产物。

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌在生产抑制真菌物质中的应用，属于微生物发酵技术领域。

背景技术

农业真菌性病害在我国广泛分布，病害真菌种类复杂多样，真菌性病害占全部植物病害70％—80％以上。真菌性病害不仅对植株本身产生破坏作用，还会传播到果实和种子中，降低果实的商品价值。更严重的是黄曲霉、禾谷镰孢霉菌和尖孢镰刀菌等会产生霉菌毒素物质，直接威胁采食动物和人类的生命健康。因真菌能形成孢子形态，具有潜伏侵染特性，可以跟随种子在合适条件下萌发继续产生破坏作用。

枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种,广泛分布在土壤及腐败的有机物中,易在枯草浸汁中繁殖而得名。枯草芽孢杆菌能形成孢子具有很好的抗逆性，并且它还有生长繁殖快、营养需求低，能高效分泌许多代谢产物，且不会产生毒素物质等特点，被认为是一种无致病性的安全微生物。

枯草芽孢杆菌和真菌都是典型的需氧型微生物，枯草芽孢杆菌可以通过自身快速繁殖来和致病性真菌竞争自由氧来抑制致病性真菌的生长。枯草芽孢杆菌会产生氨基糖类、肽类和酯肽类等抗菌物质，目前枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质对细菌类致病菌有很好地杀灭作用，但是对真菌类致病菌作用效果不明显，所以诱导枯草芽孢杆菌产生抗真菌的代谢产物是提高枯草芽孢杆菌防治和治疗农业真菌性病害的有效途径之一。

中国专利文献CN109929784A(申请号201910323006.5)公开了一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bsbc01，于2019年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号CGMCC No.17239。本发明首次公开了一种具有从青藏高原养殖区筛选获得的枯草芽孢杆菌，该菌较现有已知枯草芽孢杆菌具有显著的低氧耐受特性，作为动物饲料添加剂较现有枯草芽孢杆菌具有更好的应用效果。

虽然现有枯草芽孢杆菌中也有报道可以产生抗真菌物质，但在实际应用过程中，效果并不显著。目前均采用基因工程手段进行改造，如中国专利文献CN109136250A(申请号201811041119.8)公开了通过过表达comA基因提高抗真菌肽bacillomycin D产量的方法，该方法首先以CGMCC No.0943枯草芽孢杆菌fmbJ为出发菌株，以大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭克隆载体pMAD为骨架构建一个基因过表达载体pCBS-LPComAR，利用同源重组原理，通过双交换过程在淀粉酶位点敲入枯草芽孢杆菌fmbJ基因组comA基因的方法构建了一个高产bacillomycin D菌株，命名为fmbJcomA。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产bacillomycin D的能力大幅度提高。但该菌在低氧条件下，相关能力大幅下降。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种枯草芽孢杆菌在生产抑制真菌物质中的应用。本发明在通过液体培养基配方及培养方式的优化后，在低氧条件下不仅发酵液枯草芽孢杆菌活菌量明显提升，而且对致病性真菌的抑制效果有明显提升。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种枯草芽孢杆菌在生产抑制真菌物质中的应用，步骤如下：

(1)将枯草芽孢杆菌Bsbc01经活化培养，制得活化菌种；

(2)将步骤(1)制得的活化菌种经扩大培养，制得发酵种子；

(3)将步骤(2)制得的发酵种子接种于诱导发酵培养基中，经诱导发酵，制得发酵液；