[发明专利]一种新金分枝杆菌及其在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3酮中的应用有效

申请号：	202010177312.5	申请日：	2020-03-13
公开（公告）号：	CN111349584B	公开（公告）日：	2022-09-27
发明（设计）人：	林钦鹏;林汉标;林智德;陈斯涛;陈峰;吴婷	申请（专利权）人：	广东本科生物工程股份有限公司
主分类号：	C12N1/20	分类号：	C12N1/20;C12P33/00;C12R1/32
代理公司：	北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250	代理人：	李静
地址：	515071 广东省汕***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种分枝杆菌及其制备羟基 20 甲基孕甾中的应用
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【权利要求书】：

1.一种新金分枝杆菌，分类命名为Mycobacterium neoaurum BK076，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO.M 20191115。

2.根据权利要求1所述的新金分枝杆菌在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮中的应用。

3.一种9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮的制备方法，其特征在于，包括使用如权利要求1所述的新金分枝杆菌将甾醇类物质转化为9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮的步骤。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述甾醇类物质为植物甾醇。

5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述新金分枝杆菌的种子在含有甾醇类物质的转化培养基中发酵培养的条件为：种子接种量为5-15%（V/V），培养温度为30-34℃，转化培养基的pH值为6.5-8.5，通气量为0.05-1.5vvm，搅拌速率为200-400r/min，发酵时间为100-150h。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述转化培养基包括以下组分：甾醇类物质30-50g/L、碳源 15-50g/L、氮源 20-80 g/L、聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷混合物40-100 g/L、无机盐 2-30 g/L、乳化剂 5-15 g/L和泡敌5-10 g/L。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，

所述碳源包括葡萄糖、蔗糖、红糖、甘油、麦芽糖、糖蜜和淀粉中的至少一种；和/或，

所述氮源包括蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、鱼粉、豆粕粉、玉米浆、玉米浆干粉和棉籽粉中的至少一种；和/或，

所述无机盐包括磷酸氢二铵、硝酸钠、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾、柠檬酸铵、柠檬酸铁铵、七水合硫酸镁和硫酸亚铁中的至少一种；和/或，

所述聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷混合物包括：聚乙二醇 20-80g/L以及聚二甲基硅氧烷 20-80g/L，所述聚乙二醇为PEG2000-4000，所述聚二甲基硅氧烷粘度等级为350-10000mm2/s；和/或，

所述乳化剂包括自乳化单甘脂、聚氧乙烯单月桂酸酯、吐温-80和油酸钠中的至少一种。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述新金分枝杆菌的种子按照以下步骤制备得到：

将所述新金枝杆菌接种于种子培养基中，在转速150-200 r/min、通气量0.05-0.5vvm、30-34℃下培养36-48h。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基包括以下组分：

碳源 5-20g/L、氮源 5-30 g/L以及无机盐2-15 g/L。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基的pH值为7.0-7.5。