[发明专利]一种负载皮肤营养剂的纳米粒乳液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种负载皮肤营养剂的纳米粒乳液及其制备方法，其特征在于：包含以下重量百分比的组分：0.1%~50%的蛛丝蛋白，0.1%~10%的双‑羟乙基三羟甲基甲胺，0.1%~40%的皮肤营养剂，0.1%~85%的水醇混合物，所述蛛丝蛋白的分子量为80~100 kDa。本发明所得负载皮肤营养剂的纳米粒乳液具有生物相容性更好，更温和，刺激性低；与其他蛛丝蛋白纳米乳相比具有包封率更高、吸收渗透性更好、稳定性更好的优点。

技术领域

本发明涉及纳米粒乳液制备技术领域，特别涉及一种负载皮肤营养剂的纳米粒乳液及其制备方法。

背景技术

随着科学技术的发展和人们美容意识的提升，越来越多的美容成分被用于化妆品中，但很多原料存在溶解困难，易变色等问题。纳米制剂技术作为一种新的载体开始在化妆品中使用，但目前的纳米粒乳液多使用化学类表面活性剂，对皮肤屏障有一定的影响。

蜘蛛丝是一种天然蛋白质纤维，具有高强度、高弹性、高断裂能等机械性能以及显著的可降解性、组织相容性等生物学特性，在生物医学、材料、纺织和军事装备等领域均有重大潜在应用价值。蜘蛛丝的主要成分是蛋白质，因此与生物组织有良好的相容性，目前报道发现的蛛丝蛋白分子量约100-750 kDa。蜘蛛拖丝蛋白为高度重复序列的纤维蛋白，富含丙氨酸和甘氨酸，丙氨酸富集区可以形成疏水的 β- 折叠结晶结构，而亲水的甘氨酸富集区形成了α- 螺旋，由于蛛丝蛋白同时具有亲水端的氨基端和疏水端，所以具有一定的乳化能力。

关于优化蛛丝蛋白力学性能的重组获得等技术一直有人研究，但如何优化蛛丝蛋白的乳化性能和乳化稳定性的却鲜有报道。中国发明专利CN200680035440.4公开了生产蜘蛛丝蛋白的纳米胶囊和微胶囊的方法，但其中应用了硫氰酸胍和甲苯等溶剂，对环境和皮肤都不太友好。且其直接用大分子的蛛丝蛋白进行包覆，乳化力不好，且蛛丝蛋白不耐酸碱，生产的纳米胶囊稳定性欠佳，包封率和渗透性都不够好。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种包封率高、稳定性好的负载皮肤营养剂的纳米粒乳液。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种负载皮肤营养剂的纳米粒乳液，其特征在于：包含以下重量百分比的组分：0.1%~50%的蛛丝蛋白，0.1%~10%的双-羟乙基三羟甲基甲胺，0.1%~40%的皮肤营养剂，0.1%~85%的水醇混合物，所述蛛丝蛋白的分子量为80~100 kDa。

所述蛛丝蛋白采用以下方法制备：

A、蛛丝的预处理：称取100g蛛丝置于重量百分比为0.8%的碳酸钠溶液中80~85℃以600 r/min搅拌处理20分钟，进行第一次脱胶，脱胶完成后倒去溶液，取出蛛丝用蒸馏水反复清洗10分钟，再置于重量百分比为0.8%的碳酸钠溶液中80~85℃下以600 r/min转速搅拌处理20分钟，进行第二次脱胶，放入90℃烘箱，烘干得蛛丝纤维；

B、称取步骤A所得50g蛛丝纤维，置于重量百分比为30%的氯化钙溶液中80~85℃下以600 r/min转速搅拌至蛛丝纤维完全溶解，得到蛛丝蛋白氯化钙混合液，先将上述蛛丝蛋白氯化钙混合液用纱布过滤粗提，再放入100-750 kDa透析袋中，用蒸馏水透析36 h，除去氯化钙离子，得蛛丝蛋白溶液；

C、对蛛丝蛋白进行酶解：取适量步骤B所得蛛丝蛋白溶液，加入枯草杆菌蛋白酶进行酶解，其中枯草杆菌蛋白酶的用量为28000 U/ g，酶解时间45~65 min，酶解pH：6.5~7.5，酶解温度40℃~60℃，酶解完成得酶解混合液；

D、采用凝胶过滤层析法进行超滤纯化：取步骤C所得酶解混合液100mg，溶解于3ml的磷酸盐缓冲液中，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.0，磷酸盐浓度为10 mmol/L；然后加入层析柱中，以磷酸盐缓冲液作为洗脱剂进行洗脱，洗脱液流速1ml/min，每2 min收集一管；层析柱连接液相色谱分离层析仪检测层析柱洗脱液的吸光度，用凝胶成像系统进行分析处理，得到分子量为80~100 kDa的蛛丝蛋白。