[发明专利]一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒、方法及引物探针组合物

权利要求书

1.一种检测2019新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，

包括用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的引物、以及用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因、S基因和人B2M基因的相应探针；

所述用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的正向引物序列为5’-TGTTAATGCCTATATTAACCTTGACCA-3’，如SEQ ID NO：1所示，用于扩增2019新型冠状病毒ORF1ab基因的反向引物序列为5’-GTGAGTTTTAACCTCTCTTCCGTG-3’，如SEQ ID NO：2所示；

所述用于扩增2019新型冠状病毒N基因的正向引物序列为5’-GACAAGGCGTTCCAATTAACAC-3’，如SEQ ID NO：3所示，用于扩增2019新型冠状病毒N基因的反向引物序列为5’-GAGATCTTTCATTTTACCGTCACC-3’，如SEQ ID NO：4所示；

所述用于扩增2019新型冠状病毒S基因的正向引物序列为5’-TCCATTTTTGGGTGTTTATTACCACA-3’，如SEQ ID NO：5所示，用于扩增2019新型冠状病毒S基因的反向引物序列为5’-GTGAGACATATTCAAAAGTGCAATTATTCG-3’，如SEQ ID NO：6所示；

所述用于扩增人B2M基因的正向引物序列为5’-GTTGAGTATGCCTGCCGTGT-3’，如SEQ IDNO：7所示，用于扩增人B2M基因的反向引物序列为5’-ATGCGGCATCTTCAAACCT-3’，如SEQ IDNO：8所示；

所述用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列为5’-TTGACACTGACTTAACAAAGCCTTACATTAAG-3’，如SEQ ID NO：9所示；

所述用于检测2019新型冠状病毒N基因的探针序列为5’-ACTACCGAAGAGCTACCAGACGA-3’，如SEQ ID NO：10所示；

所述用于检测2019新型冠状病毒S基因的探针序列为5’-AAACTCTGAACTCACTTTCCATCCAACT-3’，如SEQ ID NO：11所示；

所述用于检测人B2M基因的探针序列为5’-ATGATGCTGCTTACATGTCTCGATCC-3’，如SEQID NO：12所示。

2.如权利要求1所述的一种检测2019新型冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列为如SEQ ID NO：9所示，探针5’端添加荧光报告基团FAM，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-1；用于检测2019新型冠状病毒N基因的探针序列如SEQ ID NO：10所示，探针5’端添加荧光报道基团Cy5，3’端添加荧光猝灭就团BHQ-2；用于检测2019新型冠状病毒S基因的探针序列如SEQ ID NO：11所示，探针5’端添加荧光报道基团ROX，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-2；用于检测人B2M基因的探针序列如SEQ ID NO：12所示，探针5’端添加荧光报道基团VIC，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-2。

3.一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包括2019新型冠状病毒检测预混液、RT-PCR酶液、2019新型冠状病毒阳性对照、2019新型冠状病毒阴性对照；所述2019新型冠状病毒检测预混液包含如权利要求1或2所述的引物探针组合物。

4.如权利要求3所述的一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述2019新型冠状病毒检测预混液包括多重反转录实时荧光定量PCR反应所需的dNTP、dUTP、Mg²⁺、缓冲液。

5.如权利要求4所述的一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR酶液包含逆转录酶、热启动rTaq酶以及UNG酶。