[发明专利]一种免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法及应用

权利要求书

1.一种免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于：所述方法将选择性好、特异性强的免疫富集技术与灵敏度高、准确性好的生物质谱仪-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱即MALDI-TOF-MS联合使用，对食品中沙门氏菌进行特异性富集并进行全细胞蛋白质指纹图谱分析，能够高效、快速、准确鉴定食品中的沙门氏菌。

2.根据权利要求1所述的免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于：步骤如下：

⑴样品的采集及处理；

⑵目的菌的特异性富集：使用抗沙门氏菌抗体制备免疫磁珠，对沙门氏菌进行特异性富集，制得菌体-免疫磁珠复合物；

⑶目的菌选择性增菌：将步骤⑵中的菌体-免疫磁珠复合物接种于沙门氏菌选择性增菌培养基增菌12-15h，对免疫富集所得的细菌进行选择性增菌；

⑷MALDI-TOF MS数据采集与分析：

①点样

将增菌样品经甲酸/乙醇提取法处理后取1μL上清液加至点样靶，每种处理方法得到的样品平行点4个孔，待样液滴晾干后，覆盖1μL饱和基质CHCA，干燥后进行MALDI-TOF MS鉴定；

②MALDI-TOF MS数据采集与分析

用MALDI-TOF MS对样品进行数据采集；

分析采用线性模式；激光能量：60～90Hz；收集质荷比范围m/z：2000～20000；每个样品激光轰击100次；采集到的数据导入数据库进行分析；每次试验前在采集数据的质量范围内使用大肠杆菌ATCC 8739标准品进行校准；

⑸结果判断：与数据库对比，显示鉴定结果为沙门氏菌为阳性，无鉴定结果为阴性，记录每个样品里阳性结果的比例，最后分析数据，并以多种方式显示检测结果；

其中，每次检测均设立阴性对照，阴性对照为未与待检样品反应的免疫磁珠。

3.根据权利要求2所述的免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于：将选择性好、特异强的免疫富集技术与准确性好、灵敏度高得MALDI-TOF MS生物质谱联合用于检测食品中沙门氏菌。

4.根据权利要求2所述的免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于：所述步骤⑵中特异性富集的条件为：

免疫富集沙门氏菌的检测体系为1mL，具体为：

600μL 250μg/mL磁分离后的免疫磁珠，1mL待检食品样液；

反应条件为：室温30min。

5.根据权利要求2所述的免疫富集联合MALDI-TOF MS检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于：所述步骤⑴中根据《GB 4789.4食品安全国家标准食品微生物学检测沙门氏菌检验》中样品的采集与制备方法进行样品采集与处理。