[发明专利]一种碱基编辑工具及其用途有效
| 申请号： | 202010163058.3 | 申请日： | 2020-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN111172133B | 公开（公告）日： | 2021-12-31 |
| 发明（设计）人： | 刘亚京;黄师圣;黄行许 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 严晨;许亦琳 |
| 地址： | 201210 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 碱基 编辑 工具 及其 用途 | ||
1.一种融合蛋白，所述融合蛋白自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段、第二nCas9片段和两个UGI片段，所述嵌合插入片段选自APOBEC1片段或APOBEC3A片段；
所述第一nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示；以及，所述第二nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC1片段的氨基酸序列如SEQID NO. 3所示。
3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC3A片段的氨基酸序列如SEQID NO. 4所示。
4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述UGI片段的氨基酸序列如SEQ IDNO. 5所示。
5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括核定位信号片段。
6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述核定位信号片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
7.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括柔性连接肽片段。
8.如权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述柔性连接肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8所示。
9.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo. 9~10其中之一所示。
10.一种分离的多核苷酸，编码如权利要求1~9任一权利要求所述的融合蛋白。
11.一种构建体，所述构建体含有如权利要求10所述的分离的多核苷酸。
12.一种表达系统，所述表达系统含有如权利要求11所述的构建体或基因组中整合有外源的如权利要求10所述的多核苷酸。
13.如权利要求12所述的表达系统，其特征在于，所述表达系统的宿主细胞选自真核细胞。
14.如权利要求13所述的表达系统，其特征在于，所述真核细胞选自小鼠细胞或人细胞。
15.如权利要求14所述的表达系统，其特征在于，所述真核细胞选自小鼠脑神经瘤细胞、人胚胎肾细胞、或人宫颈癌细胞、人结肠癌细胞或人骨肉瘤细胞。
16.如权利要求15所述的表达系统，其特征在于，所述真核细胞选自N2a细胞、HEK293FT细胞、Hela细胞、HCT116细胞、或U2OS细胞。
17.如权利要求1~9任一权利要求所述的融合蛋白、如权利要求10所述的分离的多核苷酸、如权利要求11所述的构建体或如权利要求12~16任一权利要求所述的表达系统在基因编辑中的用途。
18.如权利要求17所述的用途，其特征在于，所述用途具体为在真核生物的基因编辑中的用途。
19.一种碱基编辑体系，包括如权利要求1~9任一权利要求所述的融合蛋白，所述碱基编辑体系还包括sgRNA。
20.一种基因编辑方法，包括：通过如权利要求1~9任一权利要求所述的融合蛋白、或如权利要求19所述的碱基编辑体系进行基因编辑。
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