[发明专利]一种从凤丹牡丹果皮中提取及测定牡丹果皮多糖的方法

说明书

本发明涉及一种从凤丹牡丹果皮中提取及测定牡丹果皮多糖的方法，包括如下步骤：材料的预处理；混标糖标准曲线的制作；牡丹果皮多糖提取；牡丹果皮多糖得率的测定，及响应面法优化提取多糖测定，采用统计软件Design‑Expert7.0进行回归分析，预测出最佳凤丹牡丹多糖的提取组合，为果皮的合理利用寻找有效的途径。

技术领域

本发明属于天然产物应用技术领域，具体涉及一种从凤丹牡丹果皮中提取及测定牡丹果皮多糖的方法。

背景技术

牡丹原产于中国西部秦岭和大巴山一带山区，为多年生落叶小灌木。牡丹除了作为观赏植物外，在传统对牡丹的利用主要为——丹皮，具有改善心血管疾病、镇静、抗菌、抗炎和提高免疫系统活力等功效；近年来，牡丹籽油的价值和应用逐渐得到人们的认识和重用，在采摘中，牡丹种子和果皮通常一起进行收集，晾晒过后将果皮和种子进行分离，因而在生产牡丹籽油的过程中会产生大量废弃的果皮而引起环境污染，多糖对于维持人体生命活动运转正常有极其重要的作用，已有报道表明牡丹皮和牡丹叶均含有丰富的多糖成分，并且这些多糖成分均具有良好的抗氧化等功能，因此，从牡丹果皮中提取多糖成分，可以整体提升牡丹的药用价值和经济价值，对牡丹的综合利用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是为了解决背景技术中所提出的问题，而提供一种从凤丹牡丹果皮中提取及测定牡丹果皮多糖的方法，选用凤丹牡丹果皮，变废为宝，为果皮的合理利用寻找有效的途径。

本发明的目的是这样实现的：

一种从凤丹牡丹果皮中提取及测定牡丹果皮多糖的方法，包括如下步骤：

S1：材料的预处理，将收集的凤丹牡丹果皮洗净置于室内阴干，烘干后研磨成粉，将获得的牡丹果皮粉储存后，冷藏备用。

S2：混标糖标准曲线的制作，称取50mg的混标糖放入烧杯，加蒸馏水，搅拌，定容后，用移液枪分别量取不同含量的混标准糖体积的混合液至不同试管中，分别补充蒸馏水至相同体积后，采用蒽酮硫酸比色法测吸光度，拟合线性回归方程。

S3：牡丹果皮多糖提取，取S1中制得的牡丹果皮粉2g置于烧杯中，按照各自的液料比加入蒸馏水，混匀后按果皮粉末的0.8％加入纤维素酶并搅拌均匀，按照相应温度相应时间置于水浴锅中，水浴结束后,冷却至室温后离心，离心后的上清液即为牡丹果皮粗多糖提取液。

S4，牡丹果皮多糖得率的测定，吸取S3中制得的凤丹牡丹提取液0.02ml，用蒽酮硫酸比色法测量提取液的吸光度，利用公式计算出多糖得率。

S5，响应面法优化提取多糖测定，采用统计软件Design-Expert7.0进行回归分析，预测出最佳凤丹牡丹多糖的提取组合。

进一步的，S1中，凤丹牡丹果皮优选无病虫害，无杂质，无霉变，大小均一的果皮。

进一步的，S1中，将收集的凤丹牡丹果皮洗净置于室内阴干，于鼓风干燥箱60℃烘干至恒重后放于旋风磨磨粉，过100目筛，将获得的牡丹果皮粉储存于棕色磨口广口瓶，放入4℃冰箱保存备用。

进一步的，S2中，50mg的混标糖为半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖，每种各10mg，在编号1至7号的试管中用移液枪分别量取含0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12ml混标准糖体积的混合液，分别补充蒸馏水，使每只试管的溶液体积均达到1.0ml。

进一步的，S3中，离心机的转速为4000r/min,离心时间为10min。

进一步的，S4中，计公式为混标糖标准曲线方程

式中C——为样品的多糖浓度(mg/ml)；V——为提取上清液体积(ml)；N——为稀释倍数；m——为果皮质量(g)。