[发明专利]用于表达重组人β-珠蛋白的病毒载体及其应用

说明书

本发明公开了用于表达重组人β‑珠蛋白的病毒载体及其应用。本发明提供了一种DNA片段A，自5’端到3’端由如下顺次连接而成：三个DNA酶I高敏位点、HBB启动子、翻译增强子、HBB基因表达框和HBB转录增强子。本发明提供的HBB表达载体具有高效表达外源HBB蛋白的能力，在β‑地中海贫血及镰刀型贫血症的治疗中具有极高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及用于表达重组人β-珠蛋白的病毒载体及其应用。

背景技术

血红蛋白病(hemoglobinopathy)是由于血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病)，或珠蛋白肽链合成异常(珠蛋白生成障碍性贫血)所引起的一组遗传性血液病，包括β-地中海贫血、镰刀型贫血等。β-地中海贫血是一种遗传性血红蛋白病，属常染色体显性遗传，是由β-珠蛋白基因(HBB)突变导致的β-珠蛋白合成障碍，是全球最常见的单基因遗传病[Piel,F.B.,The Present and Future Global Burden of the Inherited Disorders ofHemoglobin.Hematol Oncol Clin North Am,2016.30(2):p.327-41.]。β-地中海贫血在我国东南和西南地区发病率较高，而北方比较少见，因此又称之为海洋性贫血。β-地中海贫血的发生的分子病理相当复杂，主要是由于β-珠蛋白HBB基因座发生碱基替代、缺失、删除、倒位等基因突变，造成β-珠蛋白肽链生成障碍或异常，引发合成不足或完全缺乏，使得血红蛋白α、β两种亚基比例失衡，患者不能形成功能性血红蛋白，同时导致溶血性贫血，使机体氧气供应严重不足，重者危及生命[Cao,A.and R.Galanello,Beta-thalassemia.Genet Med,2010.12(2):p.61-76.]。已知有100种以上的HBB基因突变，大多数为点突变(单个核苷酸置换、增加或缺失)，少数为大片段缺失。突变致β链合成部分受抑制者称为“β+地中海贫血”；致β链完全受抑制者称“β0地中海贫血”。β0/β0纯合子表现为重型，β+/β0杂合子多表现为中间型，β+/β表现为轻型[Old,J.M.,Screening and genetic diagnosis of haemoglobindisorders.Blood Rev,2003.17(1):p.43-53.]。由于β-珠蛋白基因突变和缺失类型繁多，存在多重杂合状态，以及γ、δ链代偿因素，临床表现从完全无症状的携带者到严重贫血的重型之间没有明显分界。其中，据统计，我国“地贫”基因携带者超过3000万人，其中重型和中间型地贫患者在30万人左右。以两广地区最为严重，广东“地贫”基因携带者超过10％，广西“地贫”基因携带者超过20％[He,S.,et al.,Prevalence and genetic analysis ofalpha-and beta-thalassemia in Baise region,a multi-ethnic region in southernChina.Gene,2017.619:p.71-75.]。目前，β-地中海贫血主要依赖定期输血进行维持治疗，给病人家庭和社会带来沉重负担。另外，过多吸收的铁超出血清转铁蛋白的能力沉积脏器，引起多器官病变，且不能达到根治的目的。异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前根治重症β-地中海贫血的唯一临床手段[Olivieri,N.F.and G.M.Brittenham,Management ofthe thalassemias.Cold Spring Harb Perspect Med,2013.3(6).]。但众所周知，造血干细胞(HSC)的来源及移植后的排斥反应极大限制了其临床应用。因此急需新的更有效的根治β-地中海贫血临床治疗方案。