[发明专利]一种蓖麻微嫁接方法

说明书

本发明公开了一种蓖麻微嫁接方法。本发明选取蓖麻无菌种子苗的下胚轴作为砧木，带胚芽的上胚轴作为接穗，通过微嫁接获得嫁接苗；再将嫁接苗插入嫁接苗培养基(添加有0.1mg/L IBA、0.2mg/L KT或0.8mg/L复硝酚钠的MS固体培养基)中培养。通过本发明的微嫁接方法，接穗与砧木愈合成完整植株，可正常进行生长发育。本方法缩短了蓖麻遗传改良的周期，并短期高效获得更多健壮的植株，为蓖麻后续研究提供了一条新途径。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种蓖麻微嫁接方法。

背景技术

蓖麻(Ricinus communis L.)，又名大麻子、红麻、草麻、牛蓖等，是大戟科蓖麻属植物。蓖麻主要分布在热带或亚热带地区，植株呈灌木或乔木状，属一年生的草本植物。在我国种植蓖麻有悠久的历史，蓖麻产量居于世界前列。蓖麻籽含油率高，约46％-56％，是制造优良工业用油的原料。蓖麻油具有耐高温、粘度高和不易凝固等特点，被广泛应用在航空、航天、轮船等领域以及精密仪器的润滑油和防护油。此外，蓖麻种子含有毒蛋白，有微毒，可用于入药，具有消肿、抗癌等作用。目前全球对蓖麻的需求量大，蓖麻的生产不能满足市场需求，而且需求量还呈现逐年上升的趋势。

目前，蓖麻的种植业存在一些问题，如科学的栽培种植技术还处于比较初级阶段，缺乏完整的管理体系，品种混杂退化等，最终影响了经济效益。近些年来关于蓖麻的生物研究越来越被重视，特别是在蓖麻遗传转化方面的研究，开始取得进展。目前关于蓖麻的组织培养方面的研究并不多，蓖麻植株的离体再生比较困难，外植体诱导分化形成的再生芽条生根困难，难以获得完整小植株。有研究探讨了不同外源激素对蓖麻外植体的再生繁殖影响，以胚轴作为外植体，在基础培养基中添加了不同浓度的噻二唑隆(TDZ)、6-BA、激动素(KT)，在含有TDZ的培养基中诱导了较多的芽数，但是这些丛生芽不易伸长，伸长的芽条还存在不易生根等问题，要获得完整植株比较困难。还有研究表明，在蓖麻遗传转化过程中所获得的抗性芽条生根困难，难以获得完整的转基因蓖麻植株。

微嫁接是一种在试管内将砧木与接穗进行嫁接的生物技术，它是将组织培养与嫁接技术相结合。自1972年Murashige等创立了微芽嫁接技术，后来被广泛地应用到柑橘脱除黄龙病等多种果树的脱毒应用。与传统的嫁接技术相比，微嫁接技术具有以下几大突出优点：(1)缩短无毒苗木的繁育周期；(2)不受时间限制，不占用土地，可在实验室内常年进行；(3)可用于追踪观察嫁接的亲和性；(4)嫁接的培养环境可人为控制，有利于提高嫁接存活率。

发明内容

本发明的目的是为解决蓖麻的再生不定芽和抗性芽条生根困难的问题，将组织培养与嫁接相结合，提供一种蓖麻微嫁接方法，建立一种有效的蓖麻微嫁接技术体系，为蓖麻新品种的培育提供技术支撑。

本发明的蓖麻微嫁接方法，包括以下步骤：

a.将蓖麻种子浸泡、去壳及灭菌处理，然后接种到MS固体培养基上无菌萌发种子苗，切取种子苗的下胚轴作为砧木，在砧木的形态学上端横切面中部向下切成V型切口；切取种子苗带胚芽的上胚轴作为接穗，将接穗的基部切成楔形切面；将切好的接穗插入砧木的V型切口中，再夹一下结合部位使接穗切面紧贴砧木切面，获得嫁接苗；

b.将嫁接苗形态学下端朝下插入嫁接苗培养基中培养，根据生长情况适时将嫁接苗移栽到栽培基质中。

优选，所述的蓖麻种子浸泡、去壳及灭菌处理是将蓖麻种子浸泡4h后，去壳，去壳种子用体积分数75％乙醇水溶液浸泡1min，再用体积分数2％次氯酸钠溶液浸泡20min，然后用无菌水清洗3-5次。

优选，所述的用于切取砧木或接穗的种子苗的苗龄为10天。

优选，所述的砧木的长度为1.5-2cm，所述的V型切口的深度为0.5cm。

优选，所述的接穗的上胚轴的长度为0.5cm。