[发明专利]一种治疗COVID-19的通用型嵌合抗原受体T细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种CAR-T细胞的制备方法，包括：将嵌合抗原受体的编码基因导入T细胞中并使所述编码基因得到表达，得到CAR-T细胞；所述CAR-T细胞外含有ACE2或能与SARS-CoV-2特异结合的ACE2片段；

所述嵌合抗原受体为名称为nCoVS-s-CAR或nCoVS-l-CAR的蛋白质，所述nCoVS-s-CAR为氨基酸序列是序列3的蛋白质；所述nCoVS-l-CAR为氨基酸序列是序列5的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述编码基因为名称为nCoVS-s-CAR基因或nCoVS-l-CAR基因的核酸分子；

所述nCoVS-s-CAR基因为编码序列是序列表中序列4的cDNA分子或DNA分子；

所述nCoVS-l-CAR基因为编码序列是序列表中序列6的cDNA分子或DNA分子。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括敲除所述T细胞中的αβTCR基因和/或向所述T细胞中导入靶向SARS-CoV-2的shRNA的编码基因并使所述编码基因得到表达；

进一步，所述敲除所述T细胞中的αβ TCR基因通过向所述T细胞中导入Cas9和靶向于T细胞抗原识别受体（TCR）alpha链的一段guide核苷酸序列实现，将这段序列记为gTRAC，所述gTRAC为序列1的第3087-3182位；

所述靶向SARS-CoV-2的shRNA为靶向SARS-CoV-2的RdRp的shRNA；

更进一步，所述shRNA的靶片段为序列2的第3446-3493位。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述敲除所述T细胞中的αβ TCR基因通过向所述T细胞中导入Cas9和能使所述gTRAC得到表达的表达盒实现，将该表达盒记为gTRAC表达盒；进一步，所述gTRAC表达盒为序列表中序列1的第2838-3182位所示的DNA片段；

所述向所述T细胞中导入靶向SARS-CoV-2的shRNA的编码基因并使所述编码基因得到表达通过向所述T细胞中导入所述shRNA的表达盒实现，将该表达盒记为shRNA表达盒；进一步，所述shRNA表达盒为序列表中序列2的第3197-3493位所示的DNA片段。

5.利用权利要求1-4中任一所述的方法制备的CAR-T细胞。

6.下述M1-M5中任一产品：

M1、权利要求1或2所述嵌合抗原受体；

M2、权利要求1或2所述编码基因；

M3、与权利要求1或2所述编码基因的生物材料；所述生物材料为下述C1）至C4）中的任一种：

C1）含有所述编码基因的表达盒；

C2）含有C1）所述表达盒的重组载体；

C3）含有C1）所述表达盒的重组微生物、或含有C2）所述重组载体的重组微生物；

C4）含有C1）所述表达盒的细胞系、或含有C2）所述重组载体的细胞系；

M4、成套试剂，含有M1、M2或M3；

M5、名称为pLV-U6-hTRAC-M1904-none或pLV-U6-hTRAC-U6-shCoVRdRp-M1904-none或pLV-puro-EGFP-RdRp或pLV-puro-CoVS的载体，所述pLV-U6-hTRAC-M1904-none的序列为序列表中序列1，所述pLV-U6-hTRAC-U6-shCoVRdRp-M1904-none的序列为序列表中序列2，所述pLV-puro-EGFP-RdRp的序列为序列表中序列7，所述pLV-puro-CoVS的序列为将序列7的第2839-3588位替换为序列8得到的序列。

7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于：M4所述成套试剂还包括敲除αβ TCR基因的物质和/或靶向SARS-CoV-2的物质和/或T细胞；

所述敲除αβ TCR基因的物质由Cas9与gTRAC组成，或由Cas9与所述gTRAC表达盒组成；

所述靶向SARS-CoV-2的物质为所述shRNA或所述shRNA表达盒。