[发明专利]编码鸡血藤花青素还原酶的基因及其应用

说明书

本发明公开了一种编码鸡血藤花青素还原酶的基因及其应用，填补了我国传统中药材鸡血藤中分离克隆花青素还原酶基因的空白。本发明所提供的花青素还原酶基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所述基因编码的蛋白质具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸的同源序列。该基因在鸡血藤根、茎、叶、花以及果实中均有表达，其中在根和茎中表达量较高，在叶中含量很低。本发明提供的花青素还原酶有助于利用基因工程技术提高鸡血藤中活性成分表儿茶素的含量，对今后鸡血藤种质资源改良具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及鸡血藤活性成分表儿茶素生物合成途径中的关键酶及其编码基因，更具体地说，本发明涉及编码鸡血藤花青素还原酶的基因及其应用。

背景技术

鸡血藤来源于豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎，具有补血活血，调经止痛，舒筋活络的功效。用于治疗月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等病症，广泛用于妇科、风湿痹痛等中成药中。研究结果表明，鸡血藤主要活性成分为黄酮类化合物，其中表儿茶素是主要活性成分之一。

表儿茶素合成途径中，花青素还原酶(Anthocyanidin reductase,ANR)催化花青素转变为表儿茶素。然而，目前尚未对鸡血藤ANR基因进行克隆，也未发现其作为提高植物表儿茶素含量的应用的研究和报道。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明的另一个目的是通过基因克隆，获得鸡血藤花青素还原酶(简称SsANR)基因的gDNA序列、cDNA序列及氨基酸序列，为后续利用生物技术手段提高鸡血藤有效部位表儿茶素的含量提供重要基础。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，本发明提供编码鸡血藤花青素还原酶的gDNA，其中，为下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.1所示的序列；

2)能编码SEQ ID No.1经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有鸡血藤花青素还原酶活性蛋白质的核苷酸序列。

编码鸡血藤花青素还原酶的cDNA，其中，为下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.2所示的序列；

2)在严格条件下与SEQ ID No.2的cDNA序列杂交且编码具有鸡血藤花青素还原酶活性蛋白质的DNA分子；

3)编码SEQ ID No.3所示氨基酸序列的核苷酸序列；

4)编码SEQ ID No.3经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有鸡血藤花青素还原酶活性蛋白质的核苷酸序列。

具有鸡血藤花青素还原酶活性的蛋白质，其中，为下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；

2)SEQ ID No.3经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有鸡血藤花青素还原酶活性的氨基酸序列。

一种用于扩增gDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示。

一种用于扩增cDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示。

一种gDNA或cDNA或蛋白质或引物作为提高植物表儿茶素含量的应用。

具体来说，能够极大程度提高植物的根和茎中表儿茶素的含量。