[发明专利]一种用于犬瘟热病毒基因检测的引物、探针及检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于犬瘟热病毒基因检测的引物、探针及检测试剂盒，其特征在于，引物、探针为反转录用引物、以及扩增引物和检测用荧光探针，试剂盒采用的检测方法为反转录聚合酶链式扩增方法，其反应液含有反转录酶、脱氧核糖核苷三磷酸、脱氧核核酸聚合酶。

2.权利要求1所述的检测犬瘟热病毒的反转录引物、以及扩增引物和检测用荧光探针，其特征为只需要一套引物、探针，检测所有基因型的犬瘟热病毒。

3.权利要求1所述的检测犬瘟热病毒的反转录引物、以及扩增引物和检测用荧光探针，其特征为反转录引物为环茎型引物，上游扩增引物和检测用荧光探针序列与反转录引物互补，下游扩增引物包含部分反转录引物序列。

4.权利要求3所述的环茎型引物其特征为：包含环部、茎部以及尾部，环部由约25~35bp碱基组成，茎部由约8~12bp左右互补链组成，尾部由6~10bp左右碱基序列组成，尾部碱基序列与犬瘟热病毒保守序列互补。

5.权利要求3所述的上游扩增引物，其特征为：其序列与反转录引物环部序列互补。

6.权利要求3所述的下游扩增引物，其特征为：其序列与病毒保守序列互补。

7.权利要求3所述的检测用探针，其特征为：探针碱基序列与反转录引物环部序列互补，5´端修饰有荧光基团，3´端具有淬灭基团。

8.根据权利要求4所述的环茎型反转录用引物，反转录反应时依靠与犬瘟热病毒保守序列互补的碱基序列进行反转录，形成序列互补DNA。

9.根据权利要求5所述的上游扩增引物，其特征在于，由于序列与反转录引物环部互补，反转录引物维持环茎型结构时不参与反应，反转录反应后进入扩增阶段，cDNA经高温变性，形成线性DNA后参与反应。

10.权利要求1所述的用于检测犬瘟热病毒基因的犬瘟热病毒检测试剂盒，包括引物对、荧光探针选择、配制RT-PCR反应体系、设置反应条件的步骤，其特征在于，所述反转录引物采用权利要求4所述的环茎型引物，所述扩增用上游引物采用权利要求5所述引物，所述扩增用下游引物使用权利要求6所述引物，检测用荧光探针采用权利要求7所述的荧光探针。

11.根据权利要求10所述的检测犬瘟热病毒基因的犬瘟热病毒检测试剂盒，其特征在于，所述设置反应条件的步骤中，反转录反应温度为42-50℃，PCR反应为两步法，反应温度设为变性温度95℃，扩增延伸温度55-60℃。