[发明专利]一种膀胱癌核酸适体的组织样本快速筛选及其在检测制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种特异性结合膀胱癌上皮细胞及早期临床膀胱癌组织的核酸适体及其在制备临床检测试剂上的应用。核酸适体的序列选自SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.8中任一序列，并将序列优化或加以修饰。本发明相对于生物抗体具有更加优越的特性，主要体现在其对靶标组织的识别具有特异性和高亲和力。核酸适体在人体内具有低毒性、无免疫原性等优势，并且可以在体外合成且保存运输便利。采用本发明可以对临床膀胱癌组织样本进行检测，且该制剂成本低、周期短、重现性好。

技术领域

本发明涉及一种可用于膀胱癌上皮细胞及早期临床膀胱癌组织样本检测的核酸适体及其在制备检测试剂中的应用。

背景技术

膀胱癌是人类泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，其发病人数位于全球癌症发病人数的第十位。膀胱癌是一种高致死性癌症，2018年全球约有54.9万膀胱癌新病例，当年就有20万人死亡膀胱癌。吸烟被认为是膀胱癌最主要的致病因素。所以膀胱癌的男性发病率和致死率远远高于女性，是全球第六大男性发病率癌症和第九大男性致死性癌症。在东亚，膀胱癌年龄标准化发病率男性为7.3/10万，约为女性年龄标准化发病率的4倍。除此之外，长期接触致癌物质、慢性细菌性感染、膀胱异物刺激等也是导致膀胱癌发病的原因。

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上皮的恶性肿瘤，其中膀胱尿路上皮癌是最常见的膀胱癌，约占90%以上。临床上，根据膀胱癌的发病位置可以分为两大类：一类是非肌层浸润性的肿瘤，恶性程度低，预后比较好，转移概率小。但是复发率高，并且有 10%～30% 日后会发展成浸润癌。另一类是基层浸润性的肿瘤，恶性程度高，容易出现转移。大部分膀胱癌患者最初的临床表现为血尿，通常为无痛性、间歇性、肉眼血尿，有时也可为镜下血尿。少数膀胱癌患者也可能首先出现膀胱刺激症状，表现为尿频、尿急、尿痛和排尿困难，而无明显的肉眼血尿。这多由于肿瘤坏死、溃疡、膀胱内肿瘤较大或数目较多或膀胱肿瘤弥漫浸润膀胱壁，使膀胱容量减少或并发感染所引起。

当前，膀胱癌的主要治疗手段仍是以手术切除为主，联合其他化疗、放射治疗等方式进行。膀胱癌的早期确诊对于手术切除的治疗效果尤为重要。但是膀胱镜检、尿液检查、核磁共振成像（MRI）等现在常见的膀胱癌诊断方式具有假阳性、灵敏度低等局限性，对于膀胱癌的临床早期筛查效果并不理想。因此，开发出一种能够特异性识别膀胱癌的分子探针，进而快速、准确的实现膀胱癌的早期诊断、病情检测以及预后治疗就是目前膀胱癌研究的关键。

核酸适体是一类很有前途的特异亲和的靶向分子探针，是采用 2009 年诺贝尔医学奖获得者Szostak等在上世纪九十年代所发展的SELEX技术筛选得到的一类具有特异识别功能的化学“抗体”。因为核酸适体是化学合成的，而且完全是在体外进行的，不依赖于体内的生物过程，因此可重复的合成，并且非常适合于高通量的筛选。除此之外，核酸适体还具备热稳定性，可逆折叠性，免疫原性低，易于合成修饰等特性，在化学生物传感分析、医学诊断与肿瘤靶向给药等方面显示出巨大的应用前景。基于核酸适体的肿瘤靶向识别与诊疗方法正逐渐成为一种新的、普遍适用的技术，为肿瘤等疾病的诊断和治疗相关领域的发展带来了新的契机。到目前为止，核酸适体结合小分子药物、功能纳米材料以及聚合物材料开发出的诊疗一体化探针，在肿瘤的治疗方面显示出极大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以快速、准确识别膀胱癌上皮细胞或早期临床膀胱癌组织样本的核酸适体及其在制备检测试剂中的应用。

本发明主要通过Tissue-SELEX技术获得一种检测膀胱癌上皮细胞的核酸适体，且不与人膀胱正常细胞结合。核酸适体选自SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.8中任一标记序列，并将序列优化或加以修饰。该核酸适体，为39至42个碱基的短链核酸序列，主要通过对序列进行修饰，例如荧光标记、生物素等，进一步拓展该核酸适体在膀胱癌诊疗中的应用。其中荧光的强度反映了该核酸适体与膀胱癌上皮细胞结合的强弱。

所述的核酸适体最优选是下述序列：