[发明专利]新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温检测试剂及其应用

说明书

本发明提供了新型小鹅痛风病毒(N‑GoAstV)的一步法环介导等温检测试剂及其应用，涉及病毒检测技术领域。本发明根据N‑GoAstV基因保守区设计合成特异性LAMP引物，包括上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3、下游外引物B3，上游环状引物LF和下游环状引物LB，检测试剂包括如下组分：10×反应缓冲液、dNTPs、MgSO₄、Bst 3.0DNA聚合酶、去离子水、显色试剂和上述引物。本发明提供的检测试剂在应用时具有特异性强、灵敏性高、操作简便、成本低廉等优点。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，特别是涉及新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温检测试剂及其应用。

背景技术

致痛风新型小鹅星状病毒(Goose Astrovirus,N-GoAstV)属于星状病毒科的成员之一，由于其发现时间较短，属种还未确定。致痛风新型小鹅星状病毒是一种无囊膜的直径为28-30nm的球形颗粒，其衣壳蛋白呈20面体结构。N-GoAstV感染广泛流行于雏鹅中，主要引起雏鹅的肠炎，肾炎，以9-12日龄的感染率最高。由于此年龄阶段，雏鹅体内来自母体抗体水平下降，加上环境污染和预防不及时，一旦感染对机体产生极大损伤。感染后多表现为高热、腹泻、花斑肾，拉白色稀粪。其病理变化表现为多内脏器官有大量的尿酸盐沉积，肾脏细胞有出血、肾小管上皮细胞坏死和尿酸盐颗粒沉积；肝细胞尿酸盐颗粒沉积和空泡变性；脾细胞有出血和坏死并伴有不同程度的病理病变。N-GoAstV与鹅细小病毒(GPV)或其他病毒性疾病混合感染时，容易引起继发病症，增加宿主死亡风险。N-GoAstV病毒感染动物模型用于研究病毒重要基因在病毒感染过程的作用以及筛选毒株。以期为研究致痛风新型小鹅星状病毒病的发病机理、评价和预测抗病毒药物的疗效提供重要依据。

核酸扩增是基因诊断技术中最常用的方法之一，目前核酸扩增的方法有聚合酶链式反应(PCR)、依赖核酸序列扩增(NASBA)、自主序列复制(SR)以及链置换技术(SDA)等，都能将微量标本进行快速扩增，但在特异性、简便程度、温度和试剂仪器要求等方面各有缺点。

发明内容

本发明的一个目的是要提供新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温检测试剂及其应用，缩短了检测时间，提高了特异性和敏感性，以及提高了操作的方便性、降低了成本。

特别地，本发明提供了用于新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温扩增引物组，所述引物组由以下引物组成：

上游内引物FIP：

TGACGACATTCGYGTCRTAATTAAT-GATAATGTCACCATGATTTGCT；

下游内引物BIP：

TGTGGGTTAAACCAGAAAATGTCA-GAATTC-CGTAAGACCACAGAAAGTCAT；

上游外引物F3：CGACGCTCARTTACTYAGG；

下游外引物B3：ACCATCACTCCTTTTAAYCAA；

上游环状引物LF：CCTTCCTTATTGACACAAGCCTAT

下游环状引物LB：AGGTCTCTGATGATATTGAGGGT。

根据本发明的另一个方面，新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温扩增检测试剂，所述试剂为致痛风新型小鹅星状病毒的等温检测试剂，所述试剂包括上面所述的引物组。

优选的，所述试剂还包括如下组分：10×反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Bst3.0DNA聚合酶、去离子水、模板RNA和显色试剂。

优选的，所述试剂中Mg²⁺的浓度为6mmol·L^-1。