[发明专利]HIF-1α基因启动子区甲基化检测引物及检测方法与应用

说明书

本发明提出了HIF‑1α基因启动子区甲基化检测引物及检测方法与应用，特点是该发明包括一对HIF‑1α基因启动子区甲基化特异性扩增引物，优点是该发明可以方便快捷地在分子水平上实现对冠心病合并抑郁情绪的预测，针对性强，同时，以HIF‑1α(缺氧诱导因子‑1α)基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为干预冠心病合并抑郁情绪的一种新手段。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种HIF-1α基因启动子区甲基化检测引物及检测方法与应用。

背景技术

我国冠心病每年约以平均5％速度递增，发病率和死亡率也逐年上升，已成为死亡首因。冠心病的发生，除常见的生物因素外，抑郁情绪对冠心病发病和预后的影响越来越显著，截止2020年，抑郁症将成为全世界引起死亡和残疾因素中的第二位，仅次于冠心病。目前，临床上尚缺乏评估预测冠心病患者出现抑郁情绪的方法。因此，建立预测患者抑郁情绪的技术方法，对冠心病的诊疗有重大意义。

冠心病的发病率和死亡率也逐年上升，在我国每年约以平均5％速度递增，已成为死亡首因；据中国心血管病中心统计，每年用于心血管疾病的支出高达1300多亿元，心血管疾病已成为重大的公共卫生问题。冠心病的发生，除常见的生物因素，抑郁情绪与冠心病存在紧密联系，是冠心病发生、发展及预后的重要独立危险因素之一，截止2020年，抑郁症将成为全世界引起死亡和残疾因素中的第二位，仅次于冠心病。尤其是急性心血管事件入院的患者中，约有20％在发病前即罹患抑郁症。在急性冠状动脉综合征患者中，抑郁症可使死亡风险增加3倍，并且死亡风险的大小与抑郁严重程度呈正相关，伴重度抑郁症的冠心病患者具有极高的死亡风险。冠心病人群罹患抑郁症的时点患病率是普通人的3-4倍。约60％急性心肌梗死后的患者有过抑郁体验，其中15％～22％的患者存在重症抑郁。冠心病初期合并轻度抑郁的患者42％于一年后发展成重症抑郁。冠状动脉狭窄或闭塞造成心肌的缺血缺氧是冠心病的病理学特征，在缺氧条件下，冠心病患者心肌细胞中HIF-1α的表达水平升高，HIF-1α在心肌细胞中表达增加和活性增加，可诱使心肌细胞对葡萄糖的摄取率降低，从而产生心肌细胞胰岛素抵抗状态。外周胰岛素抵抗增高引起中枢神经系统胰岛素抵抗的改变，诱发线粒体和多巴胺功能障碍，从而导致焦虑和抑郁行为的发生。因而外周HIF-1α水平升高可增加重症抑郁的发病率。

冠心病发生抑郁情绪是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，表观遗传修饰可以为环境因素与基因组的相互作用机理提供直接的解释。DNA甲基化最常见是的表观遗传学修饰，启动子区域甲基化抑制基因转录，表现为外周蛋白质水平降低。DNA甲基化调节基因表达，引起动脉粥样硬化导致冠心病的发生。抑郁症相关基因同样存在DNA甲基化差异。与对照组相比，抑郁症患者大部分脑区基因表达下调，基因启动子区存在高度DNA甲基化。

目前，临床上尚缺乏快速、安全、易行评估预测冠心病患者出现抑郁情绪的方法。

发明内容

本发明提出一种HIF-1α基因启动子区甲基化检引物及检测方法与应用，解决了现有技术中存在的以上问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种HIF-1α基因启动子区甲基化检测引物，包括HIF-1α基因启动子PCR扩增用上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.2。

一种HIF-1α基因启动子区甲基化检测方法，包括以下步骤：步骤1，采集冠心病抑郁症患者静脉血，提取基因组DNA；步骤2，重亚硫酸盐处理DNA样品，低速短暂离心备用；步骤3，以步骤2中的DNA为模板，使用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为引物扩增HIF-1α基因启动子，获得PCR扩增产物；步骤4，琼脂糖凝胶电泳检测扩增成功的样品；步骤5，将扩增成功的样品进行SAP反应；步骤6，T切/RNase A消化反应；步骤7，树脂纯化；步骤8，芯片点样；步骤9，将点样后的芯片使用MALDI-TOF分析，计算出DNA样品的甲基化程度。