[发明专利]一种适于快速直扩PCR检测的病毒裂解反应液

说明书

本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种适于快速直扩PCR检测的病毒裂解反应液。本发明所述病毒裂解反应液兼有拭子样品采样液，样品裂解液，扩增反应缓冲液的三种功能，避免了传统核酸检测体系需要核酸提取步骤，时间长，因样品处理量少检测敏感度低等问题；又避免了近几年建立的“一步裂解法”及“免提取直扩方法”中实际采样体积过低造成的敏感度低的缺陷。本发明所述病毒裂解反应液特别适用于人及动物传染病筛查，尤其是高风险的呼吸道病毒的安全筛查。

技术领域

本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种适于快速直扩PCR检测的病毒裂解反应液。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是一种有用的工具，用于食品、环境、临床样本的快速检测，尤其是在传染病快检中，核酸检测标准操作程序大体为样本采集、运送、核酸提取、PCR检测，此外对于一些传染病病毒，相关规范要求对原始样本在进行核酸提取前进行可靠的灭活。

典型的PCR反应需要对样本进行DNA/RNA提取和纯化的前处理步骤，去除掉众多的抑制PCR反应的因素，这一前处理步骤通常需要0.5小时完成。

现有的病毒DNA/RNA提取方法的缺点一是操作步骤繁琐，耗费时间，不利于现场样本的快速检测；缺点二常用的核酸提取方法因其提取产物浓度、纯度的差别以及对RNA的保护程度不同，将在一定程度上影响病毒核酸尤其是临界阳性样本的核酸检出。

为此，若能提供一种试剂可免去现有方法中核酸提取步骤，将减少检测时间，同时也能减少假阴性结果，提高检出率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种试剂可免去现有PCR病毒检测方法中核酸提取步骤，将减少检测时间，同时也能减少假阴性结果，提高检出率。

一种适于快速直扩PCR检测的病毒裂解反应液，其含有下列组分：

20-150mM pH8.0-8.8的Tris缓冲液，10-220mM 氯化钾，50-150mM醋酸钾，2-8mM镁离子（Mg²⁺），1-50mM硫酸铵，0.05-0.3M海藻糖，1-15%体积比的甘油及，0.01-0.05%体积比的吐温20或曲拉通-100；或

20-150mM pH8.0-8.8的Tricine或Bicine缓冲液，1-220mM 氯化钾，50-150mM醋酸钾，0.05-0.3M海藻糖，1-15%体积比的甘油，0.01-0.05%体积比的吐温20或曲拉通-100。

一些实施例中，所述病毒裂解反应液，其由下列组分组成：

20-150mM pH8.0-8.8的Tris缓冲液，10-220mM 氯化钾，50-150mM醋酸钾，2-8mM镁离子，1-50mM硫酸铵，0.05-0.3M海藻糖，1-15%体积比的甘油，0.01-0.05%体积比的吐温20或曲拉通-100；或

20-150mM pH8.0-8.8的Tricine或Bicine缓冲液，1-220mM 氯化钾，50-150mM醋酸钾，0.05-0.3M海藻糖，1-15%体积比的甘油，0.01-0.05%体积比的吐温20或曲拉通-100。

一些实施例中，所述病毒裂解反应液，其由下列组分组成：100mM pH8.0-8.8的Tris缓冲液，100mM 氯化钾，100mM醋酸钾，2.5mM镁离子，25mM硫酸铵，0.2M海藻糖，8%体积比的甘油，0.02%的吐温20或曲拉通-100。

一些实施例中，所述病毒裂解反应液，其由下列组分组成：115mM pH8.0-8.8的Tricine或Bicine缓冲液，100mM 氯化钾，100mM醋酸钾，0.2M海藻糖，8%体积比的甘油，0.02%体积比的吐温20或曲拉通-100。