[发明专利]一种D-氨基酸检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及到试剂盒的合成，具体为一种D‑氨基酸检测试剂盒及其检测方法。试剂盒中含D‑氨基酸酶、1,4‑苯二硼酸溶液和金纳米颗粒溶液；按体积比为1：1‑5：10‑20。本试剂盒简单易操作，可以实现绿色、无污染的D‑氨基酸检测，在分子生物学、生物分析化学、海洋科学以及肿瘤科学等研究领域有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及到试剂盒的合成，具体为一种D-氨基酸检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

微生物腐蚀所导致的工程材料的腐蚀失效给国民经济造成严重的经济损失，并时刻威胁着人们的人身安全[1]。研究表明，海洋环境中的腐蚀微生物在生长代谢过程中可以合成并向周围环境中释放信号分子D-氨基酸，被释放到环境中的D-氨基酸在关键的代谢过程如稳定期细胞壁重塑及生物膜解体中起到重要的调控作用。另外，腐蚀过程中生物膜的形成、发展和解体同样受到微生物严格的遗传调控，且这种调控往往通过信号分子的响应实现[2]。因此，要想更深入的了解微生物腐蚀过程中微生物膜的变化规律及进一步探索微生物腐蚀机理，信号分子的分析研究尤为重要。

当前，D-氨基酸的检测分析方法主要有气相层析法、高效液相法、酶法，以及生物传感器检测法等[3]。气相层析法根据氨基酸气态试样中各组分在两相间的分配系数不同进行分析，然而，样品需要脱盐处理，衍生处理时还要求无水及高温条件，而且用一根色谱柱无法测定全部氨基酸，故此法在氨基酸分析检测中应用并不广泛；高效液相法根据各组分在两相间分配系数不同，经过反复的吸附-解吸过程对其进行分离检测，检测结果精准，但专业化程度及成本均较高；酶法简单、实用，但存在灵敏度低的问题；而生物传感器检测法多与电化学分析方法相关，往往需要电极表面材料的层层组装，操作难度大、且耗时。因此，创建一种简单、快速，且灵敏度高的D-氨基酸检测方法迫在眉睫。

参考文献：

[1]S.Chen,D.Zhang,Corrosion behavior of Q235 carbon steel in air-saturated seawater containing Thalassospira sp.Corrosion Science 2019,148：71-82.

[2]E.Li,J.Wu,P.Wang,D-Phenylalanine inhibits biofilm development of amarine microbe,Pseudoalteromonas sp.SC2014，FEMS Microbiology letters,2016,363：198.

[3]M.Maria,G.Laura,M.Agueda,et al,Bi-enzymatic biosensor for on-site,fast and reliable electrochemical detection of relevant D-amino acids inbacterial samples，Sensors and Actuators B:Chemical 2017,242：95-101.

发明内容

本发明目的在于保护一种D-氨基酸检测试剂盒的构建方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种D-氨基酸检测试剂盒，试剂盒中含D-氨基酸酶、1,4-苯二硼酸溶液和金纳米颗粒溶液；按体积比为1：1-5：10-20。

所述D-氨基酸酶浓度为1.0-1.5μM；1,4-苯二硼酸溶液浓度为；0.1-0.5mM；金纳米颗粒溶液浓度为1.0-1.5nM。

所述金纳米颗粒溶液中金纳米颗粒粒径为10-15nm。

一种利用权利要求1所述试剂盒检测D-氨基酸的方法：将待测D-氨基酸在D-氨基酸酶的催化作用，催化后利用1,4-苯二硼酸溶液使得金胶纳米颗粒聚集，实现对待测D-氨基酸的定量检测。