[发明专利]一种融合蛋白及其应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，包括选自下列的组分：

(1)定位功能元件D1，其具有靶向和结合DNA的功能；和

(2)去甲基化功能元件D2，其具有将甲基化核苷酸转化为非甲基化核苷酸的功能。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述D1无催化活性，并且选自下组：Cas蛋白、锌指蛋白或TALENs蛋白，或其功能域，或其组合；

优选的，所述D1选自下组：dCas9、dCpf1、dCas12、dCas13、dCms1、dMAD7，或其功能域，或其组合。

3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述D2具有将甲基化胞嘧啶转换为非甲基化胞嘧啶的功能；

优选的，所述D2是选自下组的去甲基化酶或其去甲基化功能域：ROS1、TET、DME、DML，或其组合。

4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述D1和D2通过一个或多个下列组件连接：肽键、连接肽、核定位信号、表位标签，或其组合。

5.一种融合蛋白组合，其特征在于，所述融合蛋白组合包括第一融合蛋白和第二融合蛋白；

所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白的结构各自独立地如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白所示；

并且所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的D2是不同的；

优选的，所述第一融合蛋白的D2选自ROS1或其功能域，所述第二融合蛋白的D2选自TET或其功能域。

6.一种核酸，其特征在于，编码如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白或权利要求5所述的融合蛋白组合。

7.一种核酸构建物，其特征在于，包括第一核酸序列和一个或多个第二核酸序列，其中，所述第一核酸序列编码如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白或权利要求5所述的融合蛋白组合，所述第二核酸序列为gRNA编码序列。

8.一种载体，其特征在于，含有权利要求6所述的核酸或权利要求7所述的核酸构建物。

9.一种复合物，其特征在于，包含：

(1)蛋白组分，包含权利要求1-4任一项所述的融合蛋白或权利要求5所述的融合蛋白组合。

(2)核酸组分，为一个或多个gRNA序列；

其中，所述的蛋白组分与核酸组分相互结合形成所述复合物。

10.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白、或权利要求5所述的融合蛋白组合、或权利要求8所述的载体、或权利要求9所述的复合物，或所述宿主细胞的基因组中整合有权利要求6所述的核酸或权利要求7所述的核酸构建物。

11.权利要求1-4任一项所述的融合蛋白、或权利要求5所述的融合蛋白组合、或权利要求6所述的核酸、或权利要求7所述的核酸构建物、或权利要求8所述的载体、或权利要求9所述的复合物在对目标核酸进行去甲基化修饰中的用途。

12.权利要求1-4任一项所述的融合蛋白、或权利要求5所述的融合蛋白组合、或权利要求6所述的核酸、或权利要求7所述的核酸构建物、或权利要求8所述的载体、或权利要求9所述的复合物在制备用于对目标核酸进行去甲基化修饰的试剂盒中的用途。