[发明专利]与小麦赤霉病抗性相关的KASP引物组及其应用有效

专利信息
申请号: 202010120196.3 申请日: 2020-02-26
公开(公告)号: CN111270000B 公开(公告)日: 2022-07-29
发明(设计)人: 张平平;郭程瑾;宋桂成;姜朋;马鸿翔 申请(专利权)人: 江苏省农业科学院
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司: 江苏圣典律师事务所 32237 代理人: 杨文晰
地址: 210014 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 小麦 赤霉病 抗性 相关 kasp 引物 及其 应用
【权利要求书】:

1.与小麦赤霉病抗性相关的KASP引物组在检测小麦赤霉病抗性中的应用,其特征在于,所述KASP引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第一正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的第二正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的通用反向引物;具有等位变异g的小麦样品赤霉病抗性优于具有等位变异a的小麦样品;

所述小麦为长江中下游麦区小麦。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述在检测小麦赤霉病抗性中的应用是指:以所述第一正向引物、第二正向引物、通用反向引物构成的KASP引物组对小麦样品进行PCR扩增,同时以扬麦158和郑麦9023作为对照;如获得的小麦样品PCR扩增产物的荧光信号与扬麦158荧光信号一致,则小麦样品具有等位变异基因型g;如获得的小麦样品PCR扩增产物的荧光信号与郑麦9023荧光信号一致,则小麦样品具有等位变异基因型a;具有等位变异g的小麦样品赤霉病抗性优于具有等位变异a的小麦样品。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增是指:

PCR反应体系:总体积为4μL,包含2×KASP Master Mix 1.9444 μL、72x KASP primerMix 0.0556 μL、浓度为20 ng/μL的小麦样品基因组DNA 2.0 μL;其中,每500 uL的72xKASP primer Mix,包含:浓度均为100 uM的所述第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物各60 uL、60 uL和150 uL;

PCR反应程序,第一步:94℃,15 min;第二步:94℃,20 s;第三步:65℃,1 min,每个循环降低0.8℃,共进行11个循环;第四步:94℃,20 s;57℃,1 min,共进行39个循环;第五步:16℃,10 min。

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