[发明专利]一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法

说明书

本发明公开了一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法，以河豚鱼为样本，经清洗、去杂、均质、定量混合、冻干、粉碎、过筛、分装、辐照、保藏等工艺，制得候选标准物质。对分装好的标准物质，进行最小取样量、均匀性、稳定性检验，确保其满足国家标准物质特性的需求。本发明的制备方法，可更好地保留基质中的原有成分，且具有较好的均匀性、稳定性、复水性以及更长的保质期，填补了国内外河豚毒素基质标准物质的空白；本发明的基质标准物质可有效评价相关实验室的河豚毒素检测能力和水平，可用于河豚毒素定性定量分析的质量控制，确保水产品中河豚毒素检测的准确性，为食品安全保驾护航。

技术领域

本发明属于计量技术领域，具体涉及一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法。

背景技术

河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）是鲀鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱，其分子式为C₁₁H₁₇O₈N₃，为氨基全氢喹唑啉型化合物，是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一，其毒性比氰化物还要高1250多倍，0.5mg即可致人于死命。长期以来，国内外学者对河豚毒素的起源进行了一系列研究。目前，多数专家学者认为，TTX 的真正来源不是动物本身, 而是通过食物链聚集或由其共生的微生物产生。人工饲养时，通过把握水源与投喂的饲料，改变河豚的食物链，能有效控制河豚毒素的产生，但对于人工养殖的河豚鱼也需要严格监控其毒素含量，确保食用安全。

随着河豚毒素的毒理、形态以及代谢分析的深入，水产品中河豚毒素必将是食品安全检测关注的重点内容，与之配套的检测技术需要进一步成熟并成体系，河豚毒素相关的基质标准物质的需求更加迫切。截止目前，查阅文献与国际权威标准物质数据库（例如国际标准物质数据库COMAR、欧盟标准物质数据库IRMM和ERM、美国National Institute ofStandards and Technology (NIST) 、加拿大National Research Council of Canada(NRCC)等），世界各国食品基质生物毒素类标准物质均不包括河豚毒素基质标准物质。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法，填补国内外河豚毒素基质标准物质的空白，且制备的标准物质具有良好的均匀性和稳定性。

为达到上述目的，本发明采用的具体技术方案如下：

一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法，包括以下步骤：

S1. 样本采集：采集野生河豚鱼作为基质标准物质的阳性样本，养殖的河豚鱼作为阴性样本；

S2. 样本处理：分别将阳性样本和阴性样本分解出肌肉、肝脏，称量后将组织剪碎，充分均质；

S3. 候选物制备：

① 利用液相色谱-串联质谱法，对阳性、阴性样本中的河豚毒素含量进行测定，然后按照预设的标准物质总质量、毒素含量，计算出阳性样本、阴性样本混合所需的质量，按计算值混合阳性样本和阴性样本；

② 将混合样本搅拌混匀，再进行冷冻干燥；

③ 将干燥后的块状样本粉碎过筛，得到河豚毒素成分分析候选物；

S4. 候选物的分装、保藏：将得到的候选物混匀，然后随机抽取至少10份小样，进行均匀性初筛，如果测得小样的河豚毒素含量的RSD≤5%，则可作为河豚毒素成分分析标准物质进行样本分装，否则继续延长混匀时间；样本分装密封，经Co-60 γ 射线照射灭菌后，在-20～-80℃冷冻保存。

S5. 性能评估：对步骤S4制备的候选物，进行最小取样量、均匀性、稳定性检验。