[发明专利]DNA甲基化检测方法及相关应用

权利要求书

1.一种DNA甲基化检测方法，该方法包括：

(1)用甲基化敏感性限制性内切酶处理一部分DNA样本，

(2)对于经过所述酶处理过的DNA样本和未经所述酶处理的DNA样本，对待测DNA中含有至少一段所述酶所识别序列的序列进行扩增，

根据经过所述酶处理的DNA样本的扩增结果和未经所述酶处理的DNA样本的扩增结果，确定所述基因的甲基化情况。

2.一种DNA甲基化检测试剂盒，其中所述试剂盒包含：甲基化敏感性限制性内切酶和用于DNA扩增的试剂。

3.甲基化敏感性限制性内切酶在制备DNA甲基化检测试剂盒中的用途，其中所述试剂盒包含用于DNA扩增的试剂。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒或用途，其中所述试剂包括用于对待测DNA中含有至少一段所述酶所识别序列的序列进行扩增和/或检测的试剂，例如扩增引物和/或检测探针。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法、试剂盒或用途，其中所述酶特异性地切割未甲基化序列或切割甲基化序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法、试剂盒或用途，其中所述酶特异性地切割未甲基化序列，所述酶优选为选自在酶识别序列中含有CpG的甲基化敏感性限制性内切酶，更优选为选自BstUI酶、HpaII酶和HhaI酶的一种或更多种酶。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法、试剂盒或用途，其中所述酶特异性地切割甲基化序列，所述酶优选为选自在酶识别序列中含有CpG的甲基化特异性限制性内切酶，更优选为McrBC。

8.根据权利要求4-7中任一项所述的方法、试剂盒或用途，其中所使用的上游和/或下游扩增引物和/或检测探针含有所述酶所识别的序列。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法、试剂盒或用途，所述方法或试剂盒用于癌症的诊断和/或预后；所述癌症优选为选自胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、宫颈癌和头颈癌中的一种或更多种癌，更优选为胃癌。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法、试剂盒或用途，其中所述待测DNA为RNF180基因，优选扩增RNF180基因中包含选自SEQ ID NO:1-3的序列、或扩增选自SEQ ID NO:1-3的序列。