[发明专利]用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的双重荧光冻干微芯片、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的双重荧光冻干微芯片，其特征在于，用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；所述荧光PCR反应体系包括下述引物和探针：

ORF1a/b基因上游引物：5＇- ATGTACGTGCATGGATTGGC-3＇，

ORF1a/b基因下游引物：5＇-GGTGTATCAACATAACCTGTAGGTAC-3＇，

ORF1a/b基因Taqman探针：5＇- CCAATTTACCTTTACAGCTAG-3＇；

N基因上游引物：5＇- TCTCCTGCTAGAATGGCTGG -3＇，

N基因下游引物：5＇- TCAAGCAGCAGCAAAGCAAG-3＇，

N基因Taqman探针：5＇- AATGGCGGTGATGCT-3＇。

2.根据权利要求1所述的冻干微芯片，其特征在于，所述荧光PCR反应体系还包括：Taq酶、反转录酶、海藻糖、Tris-Cl、dNTP、Mg²⁺。

3.根据权利要求1所述的冻干微芯片，其特征在于，所述ORF1a/b基因和N基因的Taqman探针的5`端标记有荧光报告基团；3`端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求1所述的冻干微芯片，其特征在于，所述ORF1a/b基因的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为FAM；所述N基因的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为ROX；所述ORF1a/b基因和N基因的Taqman探针的3`端标记的荧光淬灭基团均为MGB。

5. 根据权利要求1所述的冻干微芯片，其特征在于，所述荧光PCR反应体系包括：上游引物0.8μM；下游引物0.8μM；Taqman探针0.4μM；DNA聚合酶0.5U/μL；反转录酶0.5U/μL；dNTP0.4mM；Mg²⁺4mM；海藻糖5μM；Tris-Cl 6mM，其余为灭菌去离子水，总体积为36μL，每孔体积为1.2μL。

6. 根据权利要求2所述的冻干微芯片，其特征在于，所述荧光PCR反应体系包括：上游引物0.8μM；下游引物0.8μM；Taqman探针0.4μM；DNA聚合酶0.5U/μL；反转录酶0.5U/μL；dNTP0.4mM；Mg²⁺4mM；海藻糖5μM；Tris-Cl 6mM，其余为灭菌去离子水，总体积为36μL，每孔体积为1.2μL。

7.根据权利要求1-6任一所述的冻干微芯片，其特征在于，所述微芯片上设置有若干个加样孔；所述荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述加样孔内。

8.根据权利要求7所述的冻干微芯片，其特征在于，所述微芯片上的加样孔为30个；所述微芯片的底部结构、形状、大小与PCR仪的加样板相适配。

9.根据权利要求1-6、8任一所述的冻干微芯片，其特征在于，所述冻干包括如下步骤：将装有所述荧光PCR反应体系的微芯片置于-80℃冷冻1h后再进行设备冻干。

10.根据权利要求7所述的冻干微芯片，其特征在于，所述冻干包括如下步骤：将装有所述荧光PCR反应体系的微芯片置于-80℃冷冻1h后再进行设备冻干。

11.根据权利要求9所述的冻干微芯片，其特征在于，所述设备冻干包括：预冻阶段，隔板温度下降到-55℃，预冻时保持时间为1h，然后设备进行抽真空，保持冷冻干燥1h；解析干燥阶段，再将隔板温度升至-25℃保持1h，然后将隔板温度升至37℃并保持2h，最后将隔板降至25℃并保持1h。