[发明专利]检测人TPMT基因和NUDT15基因多态性的组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体的，涉及人TPMT基因和NUDT15基因多态性检测领域。提供了一种组合物，其检测人TPMT基因和NUDT15基因多态性；与此同时，还提供了所述组合物用于检测人TPMT基因和NUDT15基因多态性的用途、包含所述组合物的试剂盒以及用于检测人TPMT基因和NUDT15基因多态性的方法，使用本发明的组合物以及方法，检测TPMT的3个SNP位点和NUDT15一个检测位点，使得检测巯嘌呤药物代谢能力更加全面，且灵敏度高，检测迅速。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，更具体的，属于人TPMT基因和NUDT15基因多态性检测领域。

背景技术

巯嘌呤类药物如6-巯基嘌呤(mercaptopurine，6-MP)、6-硫鸟嘌呤(thioguanine，6-TG)和硫唑嘌呤(azathioprine，AZP)等是一类具有免疫抑制作用的抗代谢药。6-TG和6-MP常用于恶性肿瘤的化疗，AZP则主要用于自身免疫性疾病及器官移植患者。硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性表现出单基因共性遗传并分解代谢硫嘌呤。TPMT等位基因变异与酶活性低和硫嘌呤的明显药理作用有关。NUDT15基因中导致其功能丧失的等位基因在亚洲人和西班牙裔中很常见，其可降低活性硫嘌呤核苷酸代谢产物的降解。2018年CPIC指南推荐了基于TPMT和NUDT15基因型来调整巯基嘌呤的用药剂量。

巯嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase，TPMT)是一种催化巯嘌呤类药物如6-巯嘌呤(6-mercatopurine，6-MP)硫代甲基化的胞浆酶。在体内6-MP代谢为硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGN)掺入DNA而发挥细胞毒效应，但通过TPMT甲基化可生成无活性的代谢产物。TPMT活性与6-MP的疗效和毒性反应相关，TPMT的遗传多态性与嘌呤类药物的疗效和毒性有关，人体TPMT活性呈三态分布，约90％的个体为TPMT野生型的高酶活性者；10％的个体为TPMT杂合子变异者，表现出中等酶活性；0.3％的个体为TPMT纯合子变异者，导致TPMT活性低或无活性。TPMT杂合子变异者可耐受65％的6-MP标准剂量，纯合突变者仅能耐受5％～10％的标准剂量。现已发现20余种TPMT基因突变，其中TPMT*2、TPMT*3最为常见，占中等酶活性和低酶活性个体的90％以上。活性高的患者长期服用巯嘌呤类药物易产生耐受性，可能增加复发率；活性低的患者即使使用常规剂量的硫嘌呤类药物，也会增加发生严重的血液学不良反应的风险，甚至会导致患者死亡。FDA已批准在6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤和硫唑嘌呤的药品说明书中增加在用药前进行TPMT基因多态性检测的建议。

核苷二磷酸链接部分X型结构域基因15(NUDT15)基因编码的水解酶能使硫唑嘌呤的活性代谢物6-TGTP和6-TGDP去磷酸化而减少毒性，是硫嘌呤活化和毒性的负调节剂。NUDT15基因的突变导致硫嘌呤的代谢不良，并且与硫嘌呤诱导的早期白细胞减少有关。尽管目前尚缺乏多民族研究来检验这两种TPMT和NUDT15变体，实际上，TPMT与NUDT15活性降低功能的携带者对硫嘌呤的耐受程度(例如巯基嘌呤)在很大程度上相似。因此，CPIC对NUDT15多态性检测的建议与TPMT相似。对于NUDT15正常代谢者(NUDT15*1/*1)，无需更改起始剂量。对于NUDT15中间代谢物(NUDT15*1/*3)，应考虑减少起始剂量以尽量减少毒性，对于NUDT15弱代谢者(NUDT15*3/*3)应降低用药剂量大幅或考虑使用替代药物。

目前，存在一些可以检测两者的基因多态性的产品。例如中国发明公开CN109486932A公开了可以检测TPMT基因的rs1142345位点和NUDT15基因的rs116855232位点中的至少一种；中国发明公开CN107574239A也提及检测巯嘌呤药物SNP需要检测TPMT基因的rs1142345位点和NUDT15基因的rs116855232位点。但是由于TPMT所对应的SNP位点不只有这一个，CPIC指南建议检测TPMT基因和NUDT15基因四个多态性位点，因此，这两者都存在着检测巯嘌呤药物代谢能力的不准确和不全面的缺陷。