[发明专利]一种利用蛋白抗体进行RNA免疫沉淀的试剂盒

说明书

本发明公开了一种利用蛋白抗体进行RNA免疫沉淀的试剂盒，属于免疫沉淀技术领域。该试剂盒主要是利用目的蛋白质进行免疫沉淀，以分离与该蛋白结合的RNA。与现有的millipore公司的试剂盒相比，该试剂盒具有特异性高、效率高、耗时短、成本低、操作简便等优点，且不需要特别的仪器即可进行实验，所用试剂也皆为实验室常用试剂，大部分无毒无害；先使用福尔马林溶液使各种蛋白质结构固定，确保蛋白‑RNA复合物结构遭受破坏，降低RNA得率，同时使各种核酸酶失活，减少了其对RNA的降解。

技术领域

本发明涉及一种利用蛋白抗体进行RNA免疫沉淀的试剂盒，属于免疫沉淀技术领域。

背景技术

在机体内有很多的RNA结合蛋白，这些蛋白结合RNA之后会对RNA进行切割或者剪切或者运送到特定的部位转录成蛋白质后发挥特定的功能，在病理条件下，特定蛋白质结合的RNA会发生质和量的变化，将RNA分离出来进行后续检测如实时定量PCR或者测序，可深入了解疾病的发病原理，有利于开发新的治疗药物。

目前国内尚未有开发RNA免疫沉淀试剂盒的公司，如果按照文献自己摸索需要花费大量的时间进行实验条件的优化，而国外公司如millipore公司的试剂盒价格昂贵且到货周期长，操作繁琐，millipore的试剂盒到货周期一般为3-4周，且需要2-3天甚至更久才能完成整个实验，且实验过程中需要用到大量的有机溶剂，对人体及环境有害，除此之外，millipore的试剂盒中提供有近20种试剂，对操作人员的技术及耐心是极大考验，且实验过程需要用到-80℃超低温冰箱，RNA由于容易降解，长时间的操作会降低其得率，实验过程中试剂太多容易出错，造成实验结果的不准确，所以开发一款经济实惠、操作简单、耗时较短又稳定的试剂盒迫在眉睫。

发明内容

本发明提供了一种利用蛋白进行RNA免疫沉淀的方法，该方法主要是利用目的蛋白质进行免疫沉淀，以分离与该蛋白结合的RNA。在机体内有很多的RNA结合蛋白，这些蛋白结合RNA之后会对RNA进行切割或者剪切或者运送到特定的部位转录成蛋白质后发挥特定的功能，在病理条件下，特定蛋白质结合的RNA会发生质和量的变化，将RNA分离出来进行后续检测如实时定量PCR或者测序，可深入了解疾病的发病原理，有利于开发新的治疗药物。

本发明的目的是提供一种利用蛋白抗体进行RNA免疫沉淀的试剂盒，包括：

(1)用于和蛋白抗体结合的protein A/G磁珠；

(2)含有RNA酶抑制剂的裂解细胞或者组织的裂解液；

(3)用于固定蛋白质结构的福尔马林溶液；

(4)用于吸附掉多余福尔马林溶液的甘氨酸溶液；

(5)用于抑制蛋白质或者RNA降解的抑制剂；

(6)用于进行蛋白RNA免疫沉淀的缓冲液RIP buffer。

本发明的一种实施方式中，所述的磁珠是同时含有蛋白A及蛋白G的IgG结合区的重组融合蛋白。

本发明的一种实施方式中，所述的裂解液包含45-55mM Hepes，0.3-0.5M NaCl，0.5-1.5mM EDTA-Na₂，0.5-1.5mM DTT，0.25％-0.75％Triton-X100，5％-15％Glycerol，调节pH至7.5

本发明的一种实施方式中，所述的福尔马林溶液初始浓度是36-40％。

本发明的一种实施方式中，所述的甘氨酸溶液的浓度是1-3M。