[发明专利]一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用

说明书

本发明改变涉及嗜酸乳杆菌技术领域，从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌、利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液、将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上分别连续传代培养，筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液；本发明培育的嗜酸乳杆菌的菌悬液用于喂养猪，能够增强猪的免疫力，降低腹泻等；选育方法简单高效，能够选育出发酵培养活力强，保藏期长的嗜酸乳杆菌，用于改善猪的肠道微环境，增强猪的免疫力。

技术领域

本发明涉及嗜酸乳酸菌技术领域，具体为一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用。

背景技术

目前，在畜牧业中使用抗生素是个普遍的现象，在饲料中添加抗生素，可以预防动物疾病，提高生产性能，但抗生素长期使用容易造成致病菌的耐药性以及动物肠道菌群失衡。在畜牧业中寻找抗生素替代物意义巨大，微生物制剂是一种很好的替代品。其中，嗜酸乳杆菌具有调节肠道菌群、增强机体免疫力及帮助消化和吸收等生理作用，其作为绿色无害的饲料添加剂的应用已收到广泛的关注。

由于乳酸杆菌不耐受胃酸、胆汁酸等低pH的环境，以及人工发酵制得菌体活力较低，保藏期较短，从而限制了乳酸菌得生产和应用。选育耐受性强及生产活力高得优势菌株具有很大得市场空间及应用价值。

养猪废水具有较高浓度的生物需氧量(BOD5)、化学需氧量(CODCr)、总单(NH3-N)以及总磷(TP)，一般的微生物难以在其中生长，嗜酸乳杆菌作为肠道微生物之一，可以适应一定浓度的养猪废水环境，利于高浓度的养猪废水理论上可以筛选获得在猪肠道中适应性强及活性高的优势菌株。

菌株得选育通常采取物理和化学诱变得方法，例如紫外诱变、等离子诱变、甲基磺酸乙酯(EMS)、亚硝基胍(NTG)等诱变剂诱变等。常规的筛选包括流式细胞仪筛选法、低pH筛选法、高温筛选法等。这些方法存在毒性大，效率低等问题。

基于此，本发明设计了一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用，以解决上述问题。

发明内容

嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus已于2016年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO:CCTCC M2016139。

本发明的目的在于提供一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用，以解决提供一株活性高、保质期长的嗜酸乳杆菌突变菌株，该菌株在发酵后可长期稳定保藏，饲养猪后，可起到提高猪消化吸收能力、免疫力及预防疾病等作用的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种嗜酸乳杆菌的选育方法，包括如下步骤：

从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌；

利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落；

将所得单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液；

将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上；

选择固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分别连续传代培养，培养基仍为固体养猪废水培养基；

筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液。

优选的，固体养猪废水培养基对分离纯化的嗜乳酸杆菌进行培养环境为 37-40℃下活化10-15h，单菌落接种于种子培养基上培养环境为37℃下摇床培养10-15h得到种子液，种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释至106-108cfu 得到菌悬液。