[发明专利]一种泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与脂质组合的复合物

说明书

一种泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与脂质组合的复合物，涉及基因治疗领域，其包括泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与脂质。所述复合物由中的任意一种与DOTAP和DOPE组成；所述复合物作为核酸载体比病毒载体成本低，便于质量控制，比一般纳米载体转染效率高，毒性小，生物相容性好，在体外实验中给药后无需换液，特别适合离体细胞的转染，体内体外转染均有较高表达，且制备简单，创造性地解决了核酸尤其是mRNA安全高效地在体内外递送的难题。

技术领域

本发明涉及基因治疗领域，具体涉及一种用于核酸递送的泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与脂质组合的复合物纳米粒，以及制备这种复合物纳米粒的方法，及其用于体内外细胞基因转染的用途，及其在疫苗新药领域的应用。

背景技术

基因治疗是指将外源治疗性基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。基因递送是通过递送技术将有生物活性的外源治疗性基因递送至病人的受体细胞中，并使外源治疗性基因翻译产生蛋白多肽从而治疗某种疾病。基因转染是一种将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能的技术。疫苗一般分为两类：预防性疫苗和治疗性疫苗。预防性疫苗主要用于疾病的预防，接受者为健康个体或新生儿；治疗性疫苗主要用于患病的个体，接受者为患者，如肿瘤患者。预防性疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。肿瘤疫苗属于治疗性疫苗，其工作原理是将肿瘤细胞、肿瘤相关蛋白或多肽、表达肿瘤抗原的基因等，导入患者体内，克服肿瘤引起的免疫抑制状态，增强免疫原性，激活患者自身的免疫系统，诱导机体细胞免疫和体液免疫应答，从而达到控制或清除肿瘤的目的。

mRNA疫苗是近几年发展起来的新型疫苗，是继减毒疫苗、基因工程疫苗、DNA 疫苗之后的第5代新型疫苗，安全性比DNA疫苗更具优势。mRNA疫苗作为一种新的应对方案，是将编码抗原蛋白的mRNA直接导入细胞，通过细胞的表达系统合成蛋白,从而诱导特异免疫应答，与传统的减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗(含多肽疫苗)、载体疫苗、DNA疫苗相比有明显的优势。

首先，mRNA可被正常的细胞过程降解，降低代谢毒性的风险，体内半衰期可以通过某些修饰和递送方式进行调节，因此mRNA在体内会经历一个自然的降解过程；其次， mRNA易于合成，可编码任何新抗原，mRNA疫苗可以快速制备；另外，mRNA水溶性较好，更易成药，通过搭载各种修饰和递送方式，可有效提高mRNA疫苗稳定性，避免其在进入细胞前被体内RNA酶所降解；mRNA进入胞内后通过蛋白质翻译由机体自体产生足够的新抗原以快速启动局部T细胞，mRNA疫苗能够有效诱导B细胞和T细胞免疫应答，能引起免疫记忆效果，可以传递更多有效抗原。免疫原性方面，mRNA疫苗可以被专门设计为编码多种肽和蛋白质结构，从而表达整个抗原，还可以设计成一次表达多个抗原或在同一个纳米制剂中包含几个甚至几十段IVTmRNA序列用于制备多价 mRNA疫苗。此外mRNA疫苗是非感染性的，属于非集成平台，避免了感染和插入突变的风险，还有成本低，便于保存和运输的优点。