[发明专利]一种用于预测羽衣甘蓝叶缘性状的分子标记及其应用

说明书

本发明涉及一种用于预测羽衣甘蓝叶缘性状的分子标记的使用方法，所述分子标记为CAPS_F和CAPS_R，所述CAPS_F核苷酸序列见SEQ ID NO：1，所述CAPS_R核苷酸序列见SEQ ID NO：2，所述分子标记的应用于早期预测在任意发育阶段下栽培的羽衣甘蓝的叶缘缺刻性状。本发明建立了一种应用CAPS分子标记在不受发育阶段影响的情况下，早期预测羽衣甘蓝叶缘缺刻性状的方法，为羽衣甘蓝叶形鉴定与新品种选育具有重要的科学指导意义。

技术领域

本发明属于植物分子领域，具体涉及一种用于预测羽衣甘蓝叶缘性状的分子标记及其应用，可用于羽衣甘蓝叶形分子标记辅助选择育种。

背景技术

羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）是十字花科芸薹属二年生观叶植物，叶形叶色丰富绚丽，美观大方。叶形是羽衣甘蓝的重要观赏性状之一，有裂叶、圆叶、皱叶等多种类型。羽衣甘蓝进入莲座期叶发育成熟，叶缘发育完全。

传统的表型鉴定方法鉴定羽衣甘蓝叶形性状时，往往需要到莲座期才能准确鉴定，而羽衣甘蓝从播种到莲座期需要3个月的时间，由于羽衣甘蓝不同发育时期的叶片还受到环境因素的影响，影响表型的判断。此外，羽衣甘蓝为二年生植物，营养体春化类型，难以加代，一旦延迟表型鉴定期，会浪费育种周期中的一整年时间。DNA分子标记能够对植物基因组中某一段特定的 DNA 片段进行检测和分析，它具有不受植物环境条件与发育阶段差异的影响，不受植物组织类型差异或基因是否启动表达的影响，所需 DNA 模板量少，操作简单快捷等优点，是植物分子标记辅助选择育种的重要科学依据。CAPS标记是利用特异引物PCR与限制性酶切相结合而产生的一种检测SNP位点的DNA标记，该标记具有共显性、位点特异性、操作简单快速、成本低廉等特点。目前尚未见到通过分子标记预测羽衣甘蓝叶缘缺刻性状的方法。

本发明要解决的技术问题是：通过开发CAPS分子标记的方法在播种后一周内的子叶期即可鉴定叶缘裂刻性状，加快育种进程，对于羽衣甘蓝叶形育种具有重要的意义。

发明内容

为了弥补上述现有技术的不足，本发明的目的是提出一种用于预测羽衣甘蓝叶缘性状的分子标记及其应用，能够在羽衣甘蓝任意发育阶段下鉴定叶缘裂刻性状，提前预测羽衣甘蓝的叶缘性状，加快育种进程。

本发明提出了一种用于预测羽衣甘蓝叶缘性状的分子标记（序列见SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2），

所述分子标记为：

CAPS_F: cgatcatcgtcaaccacatag（SEQ ID NO：1）

CAPS_R: tagaactccacacaagactg（SEQ ID NO：2）

本发明还提出了所述分子标记的应用，可以早期预测在任意发育阶段下栽培的羽衣甘蓝的叶缘缺刻性状。

本发明还提出了所述分子标记的使用方法：其技术要点是：

（1）提取羽衣甘蓝基因组DNA

采用改良CTAB方法提取羽衣甘蓝基因组DNA，具体方法如下：

①称取0.15 g叶片于研钵中，液氮保护下充分研磨，迅速转移粉末至2 mL离心管中；

②CTAB提取缓冲液配制：称取十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）25g、氯化钠40.95 g、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）25g，量取50mL的1mol/L Tris-Hcl (pH=8)、20mL 的1 mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA，pH=8)，去离子水定容至500mL，121℃高压灭菌20 min，备用；

③向离心管中加入700 μL 65℃的CTAB提取缓冲液（含2% β-巯基乙醇），充分混匀，置于65℃水浴锅中水浴1 h，每10 min上下颠倒混匀一次；