[发明专利]一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的引物组和试剂盒有效
申请号: | 202010099653.5 | 申请日: | 2020-02-18 |
公开(公告)号: | CN113337637B | 公开(公告)日: | 2023-09-22 |
发明(设计)人: | 林峻 | 申请(专利权)人: | 苏州壹达生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
代理公司: | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人: | 戴雨君 |
地址: | 215126 江苏省苏州市自由贸易试验*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 分子 检测 sars cov 冠状病毒 引物 试剂盒 | ||
1.一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的引物组,其特征在于:其由下列6组引物组成:
A1:CTTTCTTTTCCAATGTTACTTGG;
A2:GACTTTAATAACAACATTAGTAGCG;
A3:CATCATTAAATGGTAGGACAGGGTTTTCCATGCTATACATGTCTCTG;
A4:TGCTTCCACTGAGAAGTCTAACAGGACTGGGTCTTCGAATC;
A5:CAAACCTCTTAGTACCATTGGTCC;
A6:TAAGAGGCTGGATTTTTGGTACTAC。
2.一种基于权利要求1所述引物组的分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒,其特征在于:其包括:
Bst DNA聚合酶 0.1U/μL;
10X Bst聚合酶反应缓冲液 2.5μL;
逆转录酶 0.1U/μL;
dNTPs 0.8mM;
引物A1-A6;
待测的RNA 1μL;
高纯水,补至总体积25μL。
3.根据权利要求2所述的分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒,其特征在于:所述引物A1、A2、A3、A4、A5、A6的终浓度分别为0.2μM、0.2μM、1.6μM、1.6μM、0.4μM、0.4μM。
4.根据权利要求2所述的分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒,其特征在于:其还包括阳性质控品和阴性质控品,所述阳性质控品:通过人工合成SARS-CoV-2病毒基因组中如SEQ.ID.NO.15所示序列全长DNA,并通过体外转录,制备其RNA,并使用DNA酶消化RNA制备过程中残留的DNA污染,并使用该序列的特异性引物进行qPCR质检,确认无DNA残留,最后所得的RNA;
所述阴性质控品:来自于人类293T细胞的total RNA。
5. 根据权利要求4所述的分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒,其特征在于:所述阴性质控品由来自于人类293T细胞的total RNA进行稀释。
6.一种基于权利要求2所述试剂盒的非疾病诊断目的的分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的检测方法,其特征在于:将试剂盒内各个成分混合,放置于65℃恒温设备,每隔5分钟观察一次,若样品管由澄清透明的液体变成浑浊液体,表示检出待测病毒核酸。
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