[发明专利]一株丁香假单胞菌及其在防治苹果轮纹病中的应用

说明书

本发明公开了一株丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)菌株B‑1，所述菌株B‑1保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2015813。本发明丁香假单胞菌B‑1对苹果轮纹病有显著的防治效果，实施例的研究表明，菌株B‑1可显著抑制轮纹病菌菌丝的生长，且其抑菌谱较广，除苹果轮纹病菌外，还对果蔬采后灰霉病菌、果蔬采后青霉病菌、苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、苹果炭疽叶枯病菌、苹果霉心病菌、桃褐腐病菌等多种果蔬病原真菌具有显著的拮抗作用；本发明菌株B‑1的菌悬液和发酵上清液对苹果枝干和果实轮纹病的防治效果均在70％以上，具有防治效果稳定，对环境友好等特点，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株丁香假单胞菌及其应用。

背景技术

苹果轮纹病是苹果枝干和果实重要病害之一，由葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)引起。苹果轮纹病菌全年均可侵染苹果树枝干，形成轮纹病瘤、干腐病斑或马鞍状病斑，严重消弱树势，造成死枝甚至死树；该病菌侵染果实，造成轮纹烂果。由于葡萄座腔菌自5月份即可侵入苹果幼果，近成熟期大量发生，甚至在苹果储藏和运输过程中也可造成大量烂果。

目前，全国范围内调查发现，苹果枝干轮纹病发病率高达77.6％；果实轮纹病在一般年份发病率为5％～20％，大发生年份烂果率达80％以上。2013年，山东部分苹果产区，套袋栽培苹果轮纹烂果率为20％～30％，重病果园烂果率高达70％以上。有效控制苹果轮纹病，对于保证我国苹果产业健康可持续发展具有重要意义。

目前，防治苹果轮纹病以化学药剂保护为主，化学杀菌剂具有高效、成本低、操作简便，但在防治病害的同时也对环境和人类健康可能具有潜在的风险和影响。采用生防菌剂防治苹果轮纹病对环境友好，可以避免化学防治带来的一系列问题。生防菌剂可减少或替代化学药剂的使用，从而达到防治苹果枝干和果实轮纹病的目的。现有技术中还没有采用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)用于苹果轮纹病防治的报道。如何解决上述技术问题，是目前微生物技术领域需要解决的技术问题。

发明内容

本发明所提供的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)B-1，于2015年12月31日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2015813，保藏地址为：湖北省武汉市，洪山区八一路。

本发明所提供的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)菌株B-1制备的生防菌剂，是菌株B-1发酵上清液或菌株B-1菌悬液。

本发明所提供的生防菌剂用于果蔬病害防治。

本发明所提供的生防菌剂用于苹果轮纹病的防治。

本发明所提供的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将菌株B-1划线接种在NA培养基中，于30℃恒温活化培养24h，得到活化的菌株B-1单菌落A；

(2)将所述活化的菌株B-1单菌落A，接种于装瓶量80mL/250mL的NB培养基中，180r·min^-1，30℃恒温震荡培养12h，得到菌株B-1发酵种子液B；

(3)将所述发酵种子液B按1:100的接种量接种到NB培养基中扩大培养，30℃恒温震荡培养24h，得到10⁹cfu·mL^-1B-1菌株的细胞培养液C；

(4)将10⁹cfu·mL^-1B-1菌株的细胞培养液C，在4℃条件下，12000r·min^-1离心15min，收集上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，得到菌株B-1发酵上清液，即为生防菌剂；菌体沉淀用无菌水重新悬浮，得到10⁹cfu·mL^-1的菌悬液，即为生防菌剂。