[发明专利]抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1‑snRNP抗体的检测方法和试剂盒，涉及生物技术领域。该抗原偶联磁微粒用于检测抗U1‑snRNP抗体，抗原偶联磁微粒中磁微粒偶联的抗原包括U1‑70K抗原、U1‑A抗原和U1‑C抗原；U1‑70K抗原、U1‑A抗原和U1‑C抗原的质量比为(2～10)：(2～10)：(2～10)。该抗原偶联磁微粒和抗U1‑snRNP抗体的反应性好，对抗U1‑snRNP抗体的检出率高，检测精度高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒。

背景技术

抗U1小核核糖核蛋白抗体(抗U1-snRNP抗体)是混合性结缔组织病(MCTD)的高特异性抗体，阳性率接近100％，并与MCTD的疾病活动度相关。另外，抗U1-snRNP抗体还可见于2～14％的系统性硬化症(SS)患者、25～47％的红斑狼疮(SLE)患者、17％的多肌炎(PM)患者和7％的皮肌炎(DM)患者。临床上，抗U1-snRNP抗体阳性患者常伴随着雷诺现象、间质性肺病(ILD)、糜烂性关节病等。因此，抗U1-snRNP抗体准确检测对自免疫疾病的诊断与治疗具有重要意义。

U1-snRNP由一种核糖核酸(U1-RNA)、七种史密斯(Sm)蛋白和三种U1独有的蛋白(U1-70K，U1-A和U1-C)组成，其中U1-70K、U1-A和U1-C是抗U1-snRNP抗体的靶抗原。U1-70K是一个含有437个氨基酸残基蛋白，N端包含约97个氨基酸残基，高度保守但呈无规则状(2-60号氨基酸残基)，对U1-C在U1-snRNP上的结合起到重要作用；在第100-180号氨基酸残基之间存在一个高度保守的RNA结合区，类似的结合域也存在于U1-A上；C端包含丝氨酸/精氨酸(SR)重复序列，并且丝氨酸残基存在广泛的磷酸化，不同的磷酸化导致整个蛋白的分子量和电荷的不同，从而使U1-70K表现出众多亚型。

U1-A由282个氨基酸组成，包含两个RNA结合域和一个介入式的脯氨酸富集区域。U1-C含有159个氨基酸残基，N端存在非典型性锌指结构，该结构直接和SM蛋白结合，并对U1-RNA在U1-snRNP上的结合起到重要作用；C端富含甲硫氨酸和脯氨酸，并且该区域上的精氨酸存在翻译后修饰(甲基化)。值得注意的是，Li X等人最近的研究显示U1-70K，U1-A和U1-C在U1-snRNP中有直接的物理性结合(图1引自CryoEM structure of Saccharomycescerevisiae U1snRNP offers insight into alternative splicing)：U1-70K的N端从其RNA结合域延伸环绕由7种SM蛋白组成的核心区，最终直接和U1-C相连。Kattah等学者甚至认为U1-snRNP这种天然存在的特性(相同的RNA结合域、相同的自免疫抗原表位和蛋白的直接结合等)是其拥有自免疫反应易感性的基础。

综上所述，由于U1-70K，U1-A和U1-C各自结构的复杂性、三者之间有影响抗体-抗原反应的物理结合以及原料纯度等问题，偶联过程复杂且难以掌控。

专利CN106596919A公开了一种抗U1-70K抗体检测试剂盒的制备方法，该专利使用羧基化磁微粒偶联U1-70K蛋白，但只能检测抗U1-70K抗体，无法检测抗U1-C、U1-A抗体，其临床应用存在不足。专利CN206725583U提供了一种自身抗体联合检测的试剂盒的制备方法，该专利将三种抗原直接喷涂到硝酸纤维素膜上，通过物理吸附的方法结合抗原，但存在吸附稳定性较差、非特异性的蛋白吸附、反应精度差和反应速度慢等缺点。因此，一种改进的用于检测抗U1-snRNP抗体的产品是目前需要的。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测抗U1-snRNP抗体的抗原偶联磁微粒，该抗原偶联磁微粒和抗U1-snRNP抗体的反应性好，对抗U1-snRNP抗体的检出率高，检测精度高。