[发明专利]一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底及利用该基底检测酪氨酸酶活性的方法

权利要求书

1.一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，由以下步方法制得：

(1)Au^PB@Au NPs的合成

取10mL纳米金胶溶液，加入10-20μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝(PB)溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10^-2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到Au^PB@Au胶体；

(2)Fe(NTA)溶液的合成

首先取浓度为10^-3M的九水硝酸铁溶液和浓度为10^-3M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后,往溶液中添加pH调节剂调节Fe(NTA)溶液的pH为7.0，混合液静置，得Fe(NTA)溶液；

(3)Au^PB@Au-Fe(NTA)SERS基底的合成

将步骤(1)制备好的Au^PB@Au胶体与步骤(2)制备的Fe(NTA)溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe(NTA)，去除上清液，剩下Au^PB@Au-Fe(NTA)胶体备用；

步骤(2)的pH调节剂为浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液。

2.根据权利要求1所述一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01％的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1-1.5mL质量分数为1％柠檬酸钠溶液，加入到沸腾的上述氯金酸溶液中，待沸腾15min后，反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶。

3.根据权利要求1所述一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于：步骤(3)的搅拌时间为至少30min。

4.一种利用权利要求1-3任一项所述的SERS基底检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：

S1、制备不同浓度的酪氨酸酶溶液标准溶液，加入多巴胺进行共培养，接着加入Au^PB@Au-Fe(NTA)SERS基底混匀后，进行拉曼检测；记录Fe(NTA)DA的拉曼特征峰1480cm^-1信号与普鲁士蓝2121cm^-1信号强度的比值I₁₄₈₀/₂₁₂₁为纵坐标，酪氨酸酶活性为横坐标作出相对应的工作曲线；

S2、检测待测样品中酪氨酸酶的回收率(％)：将步骤S1中所述酪氨酸酶的标准溶液替换为待测样品的溶液，按照所述步骤S1所述方法检测所述待测样品，对照工作曲线，计算得出细胞裂解液中酪氨酸酶的回收率。

5.根据权利要求4所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述工作曲线为Y＝0.163Log[C]+4.414，其中Y为I₁₄₈₀/₂₁₂₁；C为酪氨酸酶的浓度。

6.根据权利要求5所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述酪氨酸酶的最低检测限0.0003U/mL。

7.根据权利要求6所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述步骤S1中底物多巴胺的浓度为10^-3M，多巴胺与酪氨酸酶的体积比为10:1，共培养时间为3min。

8.根据权利要求7所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤S2中检测待测样品为Hela细胞裂解液。