[发明专利]一种用于病毒核酸临床检测的病毒样品保存液及其使用方法

说明书

本发明公开了一种可用于在包含高温灭活步骤的病毒核酸临床检测程序中的病毒样品保存液和试剂盒，以及其一种涉及使用所述样品保存液或试剂盒的病毒核酸临床检测方法。本发明的样品保存液、试剂盒以及临床检测方法，可以在利用高温灭活病毒的情况下，确保该病毒核酸的完整性和数量，从而能够有效地保证病毒核酸免受降解，显著提高临床检测程序中病毒核酸的检出准确率。

技术领域

本发明公开了一种可用于在包含高温灭活步骤的冠状病毒核酸临床检测程序中的病毒样品保存液和试剂盒，以及其一种涉及使用所述病毒样品保存液或试剂盒的冠状病毒核酸的临床检测程序。

背景技术

新冠病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,或SARS-CoV-2)据信是目前病毒感染性肺炎(Corona Virus Disease 2019，或COVID-19)流行的罪魁祸首。是否携带新冠病毒成为判断是否感染的关键临床指标之一。包括两次新冠病毒核酸检测均为阴性也是COVID-19肺炎治愈的临床标准之一。然而，众多来源的消息显示，临床检测中新冠病毒核酸检出的假阴性率较高。假阴性意味着漏检，不仅会导致临床中对疑似患者不能迅速确诊，也会导致漏检的病毒携带者成为潜在的病毒传染源。因此，提高新冠病毒核酸检出率十分迫切。

目前的新冠病毒核酸检测主要采用的是荧光定量RT-PCR技术。PCR是一项非常灵敏的技术。理论上，哪怕模板只有1个拷贝(1个病毒)，就有可能被检测出来，在模板量大于100个拷贝的情况下，PCR扩增结果就会非常稳定。新冠病毒是一个单股正链RNA病毒。病毒基因的模板是从病人样品中通过核酸提取的办法获得的。北京协和医院依据国家卫健委颁发的《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南(第三版)》制作的核酸检测过程教学视频(网络版，视频3分08秒至3分40秒)显示：在准备模板前，需将采集到的样品在56℃条件下进行30分钟灭活。国家卫健委颁发的《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南(第四版)》也涉及灭活材料的操作：“感染性材料或活病毒在采用可靠的方法灭活后进行的核酸检测、抗原检测、血清学检测、生化分析等操作应当在生物安全二级实验室进行”。中华医学会检验医学分会发布的《新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识》(中华医学杂志,2020,100(00):E003-E003.DOI:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2020.0003)明确指出需将样品56℃孵育至少45分钟或更高温度进行灭活。这个过程的目的是灭活病毒。由于新型冠状病毒传染性强，主要的传播途径包括呼吸道飞沫传播、接触传播、气溶胶传播和粪口传播，为了保护临检人员的安全，导致将采集到的样品在56℃条件下进行30分钟灭活成为必不可少的步骤。

但是，本发明的发明人发现，先把样品放在56℃孵育30分钟来灭活病毒，会促进样品内的病毒核酸的降解，从而会导致样品中的新冠病毒核酸的数量不足，最终导致检测出现假阴性。如何在确保临检人员安全的情况下，同时显著提高样品中病毒核酸的检出正确率，避免假阴性的产生，是目前病毒核酸的临床检测程序中亟待解决的问题。

发明内容

本发明公开了一种可用于在包含高温灭活步骤的病毒核酸临床检测程序中的病毒样品保存液和试剂盒，以及一种涉及使用所述病毒样品保存液或试剂盒的病毒核酸的临床检测程序。

一方面，本发明提供了一种核酸降解抑制剂在制备用于保存病毒样品的病毒核酸临床检测产品中的用途，其中所述病毒核酸临床检测产品为病毒样品保存液或包含该病毒样品保存液的试剂盒。

进一步，所述病毒样品保存液应用于保存的病毒样品进行高温灭活处理的步骤；所述高温灭活条件优选为56℃以上。

所述核酸降解抑制剂选自弱蛋白变性剂、蛋白酶、和核酸酶结合蛋白中的一种或多种。

在一个具体实施例中，所述弱蛋白变性剂选自Triton X-100、Tween 20、NP-40和SDS中的一种或多种。

在一个具体实施例中，所述蛋白酶为蛋白酶K。