[发明专利]一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法

权利要求书

1.一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：包含以下步骤：

1)将亲和素修饰的磁珠、生物素修饰的捕获DNA和马拉硫磷适配体混合孵育后，加入标准马拉硫磷溶液进行孵育，将部分马拉硫磷适配体脱落还原生成单链生物素修饰的捕获DNA，将单链生物素修饰的捕获DNA进行滚环扩增放大反应形成长单链DNA，滚环扩增放大反应所得混合物与辅助DNA-纳米金-丁酰胆碱酯酶信号探针进行孵育，使两者结合，再加入乙酰胆碱进行孵育，得到混合溶液；

2)将二氧化锰纳米花@硫化镉纳米复合物滴加至电极表面，进行光电检测，得到背景光电流响应值；

3)将步骤1)所得混合溶液滴加至步骤2)的电极表面，进行孵育后，进行光电检测，得到光电流响应值；

4)将不同浓度的标准马拉硫磷溶液按步骤1)～3)进行光电检测，得到一系列光电流响应值，并构建马拉硫磷溶液浓度与光电流响应变化值之间的标准曲线；

5)将待测马拉硫磷溶液按步骤1)～3)进行光电检测，获得相应光电流响应值，并根据标准曲线计算待测马拉硫磷溶液浓度。

2.根据权利要求1所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：将亲和素修饰的磁珠、生物素修饰的捕获DNA和马拉硫磷适配体混合，在30～40℃温度，孵育0.5～1.5h。

3.根据权利要求1所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：滚环扩增放大反应形成长单链DNA的过程：先利用T4 DNA连接酶及挂锁DNA反应形成DNA环状模板，再利用Phi29 DNA聚合酶催化dNTP合成长单链DNA分子。

4.根据权利要求1所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：

所述二氧化锰纳米花@硫化镉纳米复合物的制备方法：将高锰酸盐和二价锰盐通过水热反应得到二氧化锰纳米花；将二氧化锰纳米花分散至水中，加入镉盐及硫源及三乙胺通过沉淀法在二氧化锰纳米花表面生成硫化镉纳米粒。

5.根据权利要求4所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：将高锰酸钾和硫酸锰溶于水后，转移至反应釜中，在130～150℃温度条件下，水热反应20～40min，得到二氧化锰纳米花；将二氧化锰纳米花分散至水溶液中，加入硫脲、醋酸镉和三乙醇胺，加热至130～150℃，反应28～48h，即得二氧化锰纳米花@硫化镉。

6.根据权利要求1所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：所述辅助DNA-纳米金-丁酰胆碱酯酶信号探针的制备方法：在加热至沸腾的柠檬酸钠水溶液中快速注入氯金酸，并保持微沸，反应至溶液呈酒红色，即得金纳米颗粒；将金纳米颗粒分散到含丁酰胆碱酯酶与氨基修饰的辅助DNA的混合液中进行反应，形成辅助DNA-纳米金-丁酰胆碱酯酶信号探针。

7.根据权利要求6所述一种基于酶催化产物裂解二氧化锰纳米花@硫化镉核壳结构的光电化学检测马拉硫磷的方法，其特征在于：金纳米颗粒与丁酰胆碱酯酶及氨基修饰的辅助DNA反应的时间为8～16小时。