[发明专利]一种免疫胶体金混合标记法有效
| 申请号： | 202010091698.8 | 申请日： | 2020-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN111141900B | 公开（公告）日： | 2023-09-12 |
| 发明（设计）人： | 杨春江;袁志波;马孝斌 | 申请（专利权）人： | 北京纳百生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/532 | 分类号： | G01N33/532;G01N33/577;G01N33/558 |
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| 地址： | 100000 北京市大兴区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 免疫 胶体 混合 标记 | ||
1.一种免疫胶体金混合标记法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、添加裸金后，添加K2CO3调整pH值；
步骤二、添加结合物，将预定量的C线抗体添加在结合物中；
步骤三、添加BSA封闭；
步骤四、添加稳定剂；
其中：步骤二中所述结合物为无Fc段的受体蛋白；
步骤二中所述C线抗体的筛选过程为：
步骤2-1，采用预定量的封闭蛋白包被酶标板，所述封闭蛋白为BSA或OVA或酪蛋白；
步骤2-2，制备封闭蛋白单克隆抗体，培养上清1000倍稀释，OD值大于2.0；
步骤2-3，采用预定量的免疫胶体金直接标记，pH7.8～9.0；
步骤2-4，NC膜制备，T线加入预定量的封闭蛋白，C线加入预定量的羊抗鼠抗体，加入预定量的划膜液，然后进行烘膜；
步骤2-5，筛选条件：ELISA与封闭蛋白亲和力强，血清效价10万以上；与其他封闭蛋白无交叉反应；5ug/ml直接标记，10ul湿金，免疫胶体金T线不显色，C线显色强度大于1200，筛选得到C线抗体；
所述C线抗体的浓度是0.5～4.0ug/ml。
2.根据权利要求1所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：
步骤2-3中，免疫胶体金的用量为5ug/ml。
3.根据权利要求1所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：
步骤2-3中，采用0.2M K2CO3添加量0.25～10ul进行pH值调节。
4.根据权利要求1所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：
步骤2-4中，T线加入0.5mg/ml封闭蛋白，C线加入0.5mg/ml羊抗鼠抗体，划膜液0.05MPBS，烘膜条件是40℃24h。
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