[发明专利]小鼠骨髓巨噬细胞的制备和鉴定试剂盒及其用途

说明书

本发明提供了小鼠骨髓巨噬细胞的制备和鉴定试剂盒及其用途，试剂盒包括：试剂盒本体，在所述试剂盒本体内盛装有磷酸盐缓冲溶液(PBS)试剂瓶、青链霉素抗生素试剂瓶、红细胞裂解液试剂瓶、细胞培养基试剂瓶、胎牛血清试剂瓶、小鼠成纤维细胞L929培养上清试剂瓶、CD11b抗体试剂瓶、吞噬能力鉴定用菌株瓶和说明书。本发明的小鼠骨髓巨噬细胞制备和鉴定试剂盒操作简便，集骨髓巨噬细胞制备和鉴定实验所需的试剂于一身，有效提高了骨髓来源巨噬细胞培养的制备效率和存活率。

技术领域

本发明涉及细胞技术领域，更具体地，涉及小鼠骨髓巨噬细胞的制备和鉴定实验技术。

背景技术

小鼠骨髓来源的巨噬细胞是在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)或L929细胞培养上清(含巨噬细胞集落刺激因子)等存在下，对未分化的骨髓细胞进行体外分化获得的原代巨噬细胞。原代巨噬细胞可相对高产的获得，可以冷冻储存，特别可以从转基因小鼠品系中获得相应的转基因小鼠原代巨噬细胞，因此，是一种被广泛用于免疫学和细胞生物学中体外研究的原代巨噬细胞。

巨噬细胞于1884年由俄罗斯动物学家首次发现，是免疫系统中重要类型的白细胞，具有吞噬和消化细胞碎片、异物微生物、癌细胞以及其他任何不具有表面健康体细胞特异性蛋白质的物质的功能。除吞噬作用外，它们在非特异性防御(先天免疫)中起关键作用，并且还通过募集其他免疫细胞如淋巴细胞来帮助启动特定的防御机制(适应性免疫)。巨噬细胞是先天性和适应性免疫反应的关键组成部分，并且由于其强大的吞噬病原微生物活性，它们是抵御外来入侵者的第一道防线。巨噬细胞广泛分布于全身，存在于淋巴器官、肝脏、肺、胃肠道、中枢神经系统、骨骼和皮肤中。由于他们的重新分配，参与了广泛的生理和病理过程。巨噬细胞是高度通用的细胞，能够识别微环境改变并维持组织稳态。许多病原体已经进化出通过巨噬细胞作为特洛伊木马来生存，复制、感染人类和动物并在全身繁殖的机制。最近对进化、遗传、宿主-病原体相互作用的生化方面重新引起了对巨噬细胞的科学关注。

从小鼠组织中分离常驻巨噬细胞产率低且程序复杂，这制约了许多功能性巨噬细胞的研究。用适当的生长因子在体外培养骨髓细胞，以此从前体细胞分化成巨噬细胞是目前一项被业界普遍认可的作法。但是制备小鼠骨髓来源的巨噬细胞存在操作复杂、成功率低、涉及试剂较多和周期长等制备问题。目前有关小鼠骨髓巨噬细胞的制备和鉴定的“一站式”的试剂盒还未报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种小鼠骨髓巨噬细胞制备及检测试剂盒，该试剂盒可用于小鼠骨髓巨噬细胞分离培养，具有集实验操作中所需试剂于一体，使用方便，使用后可以提高小鼠骨髓巨噬细胞得率，细胞贴壁速度稳定，检测方法价格低，成本低等特点；

本发明提供了一种用于制备小鼠骨髓巨噬细胞的试剂盒，所述试剂盒包括：试剂盒本体，在所述试剂盒本体内盛装有磷酸盐缓冲溶液(10×PBS)试剂瓶、青链霉素抗生素试剂瓶、红细胞裂解液试剂瓶、细胞培养基试剂瓶、胎牛血清试剂瓶、小鼠成纤维细胞L929培养上清试剂瓶、CD11b抗体试剂瓶、吞噬能力鉴定用菌株瓷珠和说明书。

在上述试剂盒中，其中，所述磷酸盐缓冲溶液试剂瓶装有磷酸盐缓冲溶液试剂，磷酸盐缓冲溶液试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾组成，氯化钠1.37mol/L，氯化钾27mmol/L，磷酸氢二钠100mmol/L，磷酸二氢钾18mmol/L，pH 7.4；使用时稀释10倍。

在上述试剂盒中，其中，所述青链霉素抗生素试剂瓶装有浓度为10000U/ml青霉素G钠和10mg/ml硫酸链霉素的混合抗生素。

在上述试剂盒中，其中，所述红细胞裂解液试剂瓶装有红细胞裂解液试剂。红细胞裂解液试剂由氯化铵和三羟甲基氨基甲烷组成，氯化铵139.6mmol/L,三羟甲基氨基甲烷16.96mmol/L，pH 7.2。

在上述试剂盒中，其中，所述细胞培养基试剂瓶装有细胞培养基试剂，细胞培养基试剂含有DMEM培养基。