[发明专利]结直肠癌诊断中的甲基化标志物

说明书

本公开涉及结直肠癌诊断中的甲基化标志物。具体而言，本公开提供了一种结直肠癌的诊断试剂，其包含选自以下的任一项或组合：锌指蛋白ZNF322B基因启动子区的甲基化检测试剂、肌钙蛋白TNNI3基因的甲基化检测试剂。与现有技术中的生物标志物相比，ZNF322B和TNNI3基因具有更高的准确性和敏感性以及更好的依从性，将成为结直肠癌诊断的新型生物标志物。

技术领域

本发明涉及肿瘤的诊断领域。具体而言，涉及一种甲基化标志物及其在结直肠癌早期诊断和/或预后中的用途。

背景技术

结直肠癌是威胁人类健康的重要疾病，其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中位居第三位[1]。早期发现、早期诊断和早期治疗对于改善结直肠癌预后和降低死亡率至关重要[2,3]。

目前，常见的结直肠癌筛查方法包括粪便潜血试验、血清生物标志物和结肠镜检查。结肠镜检查虽然比较直观，但这种侵入性的检测具有费时、昂贵、依从性差等缺点[4]。粪便潜血试验和血清生物标志物虽不具备肠镜的缺点，但其敏感性和特异性低，仅能检出40％-60％患者[5]。因此，迫切需要更敏感、更高效普遍的结直肠癌筛查指标。

DNA甲基化是重要的表观修饰方法，是基因表达的一种有效的调节机制，参与调控机体的生理和病理过程[6-8]。甲基化位点能够干扰转录因子与DNA的结合而导致基因表达的长期抑制[9]。DNA甲基化主要发生在富含CG的区域，包括CpG岛、S-Shore、shelf区域。大约60％的基因可以通过启动子区的CpG位点甲基化发生沉默[10]。DNA甲基化在肿瘤发生中的作用已逐渐得到证实[11-13]。肿瘤细胞呈现抑癌基因的高甲基化和全基因组的低甲基化，导致基因组的不稳定和原癌基因的激活。由此可见，DNA甲基化模式的改变是肿瘤发生的标志，可以用来区分肿瘤细胞和正常细胞[14，15]。

CN108315418A公开了诊断、筛查与预测男性结直肠癌发生的DNA甲基化标志物，所述标志物是基因RPS24转录起始点前后序列的如下三组CpG位点中第(1)组、或者第(1)组与第(2)组或第(3)组的组合发生甲基化：(1)+22、+27和+29；(2)-24、-18、+89和+92；(3)+136。

CN109929919A公开了检测RNF180基因或Reprimo基因甲基化的方法和试剂盒，所述方法、试剂盒可用于结直肠癌的诊断和/或预后。

CN110195107A提供了外周血中癌症检测的核酸体DNA甲基化标志物及其应用。这些标志物包括选自以下CpG位点中的至少一个：以人核糖体DNA重复片段单元参考序列U13369.1为基准，第38974、37148、37013、37028、37076、32936、21740、23407、34657、28277位置处的CpG位点或者经修饰的CpG位点。这些标志物的甲基化状态在肿瘤组织和非肿瘤组织中存在明显差异，在肿瘤组织中低甲基化，这些标志物组合在测试集中区分患者是否患结直肠癌的ROC达到了92％。

CN110438228A提供一种用于预测结直肠癌CRC风险的DNA甲基化标志物集，所述标志物集包括：ESR1、ZNF132、ZNF229、ZNF542和ZNF677。

最近，越来越多的研究者认为外周血白细胞DNA含有表观遗传信息，可以用来评估个体的疾病风险[19-22]。

然而，白细胞DNA甲基化与结直肠癌易感性之间的关系尚未确定。鉴于此，本领域仍需寻找新型高效普遍的结直肠癌生物标志物。

发明内容

根据本公开的一些实施方案，提供了一种结直肠癌的诊断试剂或诊断装置，其包含锌指蛋白ZNF322B基因启动子区的甲基化检测试剂，其能够对锌指蛋白ZNF322B基因启动子区的甲基化水平实现定性和定量检测，例如但不限于确定：ZNF322B基因启动子区的甲基化是否存在、ZNF322B基因启动子区的甲基化状态、ZNF322B基因启动子区的甲基化含量、ZNF322B基因启动子区的甲基化水平。