[发明专利]月季花多糖、提取方法及其在制备抗凝血药物方面的应用

说明书

本发明提供了一种月季花多糖的提取方法：将干燥月季花在室温下依次用石油醚、90‑95%乙醇溶液浸提，浸提结束后过滤，残渣用蒸馏水提取，滤液减压浓缩，然后醇沉，收集沉淀，复溶后采用Sevage法除蛋白，上清液减压浓缩后再次醇沉，沉淀依次用乙醚、丙酮、乙醇淋洗后，沉淀冻干获得月季花粗多糖；月季花粗多糖经DEAE‑52阴离子交换柱层析纯化、DEAE‑Sepharose FF色谱柱纯化和Sephadex G‑100色谱柱进一步纯化获得月季花精多糖RCJ2‑Ⅰb。本发明通过测定RCJ2‑1b对急性血瘀模型大鼠各项生化指标的影响，来考察其抗凝血活性。试验结果证明：月季花多糖RCJ2‑Ⅰb的体内抗凝血效果显著，可作为一种潜在的抗凝血药物。

技术领域

本发明属于医药和/或保健品领域，具体涉及一种月季花多糖RCJ2-Ib、提取方法及其在制备抗凝血药物方面的应用。

背景技术

血栓性疾病是心脑血管疾病中发病率和死亡率较高的疾病，主要表现为心肌梗死，静脉血栓，缺血性脑梗死等。抗凝血药物是治疗血栓性疾病的三大药物之一，通过降低血液凝固性，组织血栓的延伸或扩大，通过自身的纤维蛋白系统溶解形成的血栓，使阻塞点血管再通。目前临床上所用的抗凝药仍为肝素和香豆素类口服抗凝剂。肝素包括普通肝素、低分子肝素；香豆素类抗凝剂就是华法林。虽然抗凝血药物在临床上的作用是有目共睹的，但存在着副作用，如抗凝药物肝素不能抑制与纤维蛋白结合凝血酶，出血风险相对较大，并伴有导致血小板减少的不良反应；治疗房颤及预防静脉血栓的主要药物华法林其不良反应是出血，需监测INR值；香豆素类药物会出现一定的过敏反应和胃肠道不适等症状。因此寻找一种新型的、无毒的抗凝血药物至关重要。

本发明从月季花中分离纯化的月季花多糖RCJ2-1b是以甘露糖醛酸为基本单元的聚甘露糖醛酸。目前关于RCJ2-1b的结构和抗凝血活性还未见报道。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种月季花多糖RCJ2-Ib，体内试验结果表明其抗凝血作用显著。

本发明还提供了上述月季花多糖的提取方法及其在制备抗凝血药物方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种月季花多糖的提取方法，其包括如下步骤：

1）将干燥月季花在室温下依次用石油醚、90-95%乙醇溶液浸提，浸提结束后过滤，残渣用蒸馏水提取，滤液减压浓缩，然后醇沉，收集沉淀，复溶后采用Sevage法除蛋白，上清液减压浓缩后再次醇沉，沉淀依次用乙醚、丙酮、乙醇淋洗后，冷冻干燥获得月季花粗多糖；

2）月季花粗多糖经DEAE-52阴离子交换柱层析纯化，依次用蒸馏水、0.05、0.1、0.2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱液采用苯酚-硫酸法进行检测，测定490nm处吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，减压浓缩，透析，冷冻干燥，其中，0.1mol/L NaCl溶液的洗脱峰组分为RCJ2；

3）将RCJ2经DEAE-Sepharose FF色谱柱纯化，依次用蒸馏水、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱液采用苯酚-硫酸法进行检测，测定490nm处吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，减压浓缩，透析，冷冻干燥，其中，0.2mol/L NaCl溶液的洗脱峰组分为RCJ2-Ⅰ；

4）将RCJ2-Ⅰ上样到Sephadex G-100色谱柱进一步纯化，用蒸馏水进行洗脱，采用苯酚-硫酸法进行检测，测定490nm处吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，得到两组洗脱峰，减压浓缩第2组洗脱峰，透析，冷冻干燥获得RCJ2-Ⅰb，即为月季花精多糖。