[发明专利]一种用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡，其特征在于，包括由天然细胞膜或仿生膜包绕形成的球体结构，所述膜的膜界面上修饰有特异性识别分子。

2.如权利要求1所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡，其特征在于，所述天然细胞膜包括白细胞膜、红细胞膜、血小板膜或肿瘤细胞膜中的一种；所述仿生膜包括各种组分的脂质体。

3.如权利要求1所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡，其特征在于，所述特异性识别分子选自抗体、核酸适体、多肽及配体中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡，其特征在于，所述特异性识别分子通过疏水相互作用、生物亲和作用或化学共价作用中的至少一种修饰于所述膜界面。

5.如权利要求1所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡，其特征在于，所述仿生纳米囊泡修饰有2-2000个特异性识别分子。

6.权利要求1～5任一项所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

①天然细胞膜来源纳米囊泡制备：采用机械破碎法将细胞悬液破碎为匀浆；采用蔗糖密度梯度离心进行细胞膜碎片的分离和纯化；采用纳米挤出器将细胞膜碎片挤出为粒径为50～400nm的纳米囊泡；

②人工仿生膜的纳米囊泡制备：将氯仿溶解的二油酰磷脂酰胆碱溶液旋蒸以除去氯仿，在烧瓶底部形成磷脂薄膜，并置于真空冷冻干燥机中干燥过夜；采用磷酸盐缓冲重悬磷脂薄膜，并将重悬液置于45℃和液氮中反复冻融10次，形成脂质体；利用纳米挤出器挤压粒径为50～400nm的脂质体纳米囊泡。

7.权利要求1～5任一项所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡在捕获分离肿瘤细胞中的应用，其特征在于，使权利要求1～5任一项所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡与含有肿瘤细胞的液体接触进行孵育和捕获。

8.一种仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括基板和设置于所述基板上的微阵列，所述基板两侧分别设有三个进样口和至少一个出样口；其中所述微阵列位于所述进样口与出样口之间，由多个成行排列的微柱组成；所述微阵列中各微柱表面修饰有权利要求1～5任一项所述的用于细胞捕获的流动识别纳米囊泡。

9.如权利要求8所述的仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述微阵列由多个依据确定性侧向位移原理成行排列的三角形微柱组成；所述微阵列的整体临界直径为Dc，Dc＝1.4×G×(Δλ/λ)0.48，其中，G为所述微柱与同列下一行微柱间的垂直间距；λ为同一列微柱中，各微柱垂心间距离；Δλ为同一行微柱中，后一微柱垂心相较前一微柱垂心的垂直于流体方向的偏移距离；所述Dc小于所述细胞直径。

10.如权利要求9所述的仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述Dc为0～32.3μm；G为0～50μm；λ为100～150μm；Δλ为0～20μm；所述三角形微柱的边长为10～200μm。

11.如权利要求8所述的仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述基板和或微阵列的材料为聚二甲基硅氧烷。

12.如权利要求8所述的仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述仿生纳米囊泡经物理吸附或共价键固定于所述微柱表面。

13.如权利要求8所述的仿生膜纳米界面微流控芯片，其特征在于，所述仿生纳米囊泡经生物素化，与微柱表面修饰的链霉亲和素发生共价相互作用，固定于所述微柱表面。

14.一种捕获循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括使含有肿瘤细胞的液体通过权利要求8～13中任一项所述的仿生膜纳米界面微流控芯片。