[发明专利]高产红曲色素的红曲霉菌株及利用其生产胞外色素的方法

权利要求书

1.高产红曲色素的红曲霉菌株，其特征在于：其分类命名为紫色红曲霉菌(Monascuspurpureus)，菌株号为CSU-M630，保藏编号为CCTCC NO：M 2019596，保藏日期为2019年8月1日，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心。

2.如权利要求1所述的高产红曲色素的红曲霉菌株，其特征在于所述菌株采用如下方法获得：

将亲本菌株LQ-6CCTCC NO：M 2018600利用常压室温等离子体诱变系统进行诱变，诱变条件为：产生等离子体的载气为99.999％的高纯氦气，气量为10.00SLM，入射功率120W，工作距离2mm，处理时间为150s，得诱变后的菌液；之后从诱变后的菌液中筛选出红曲色素产量最大的诱变菌株，即得如权利要求1所述的高产红曲色素的红曲霉菌株。

3.如权利要求2所述的高产红曲色素的红曲霉菌株，其特征在于，所述诱变菌株的筛选方法如下：

1)将诱变后的菌液均匀涂布于PDA平板中，于30℃中避光倒置培养7d，淘汰菌落明显偏小、生长速度慢、菌丝稀薄的菌落，筛选出菌落形态与原菌株有明显差异、生长较快或特别红的单菌落；

2)将步骤1)筛选出的单菌落接种至PDA平板培养基中，并对应编号，于30℃避光倒置培养7d，得到培养好的突变株；

3)将步骤2)获得的突变株接种至PDB培养基中，于30℃、150r/min黑暗振荡培养7d，得突变株孢子悬液；将突变株孢子悬液接入发酵液中，于30℃、150r/min黑暗振荡培养7d后测定红曲胞外色素，筛选出产量最大的菌株。

4.一种生产红曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)制备红曲霉菌孢子悬浮液：将权利要求1所述的胞外色素红高产曲霉菌株制成浓度为1.0×10⁶孢子/mL的红曲霉菌孢子悬浮液；

2)包埋固定化：将红曲霉菌孢子悬浮液与已灭菌的质量浓度为3％的海藻酸钠溶液以质量比1:7～10g/g的比例混合均匀制成海藻酸钠-孢子悬浮液，待气泡消失后逐滴滴入至已灭菌的质量浓度为8％的氯化钙溶液中，制成直径为2～3mm的固定化颗粒，之后继续让固定化颗粒在氯化钙溶液中于2～8℃条件下浸泡2～6h，然后滤出固定化颗粒，用生理盐水洗三次，之后将固定化颗粒浸泡在生理盐水中于2～8℃保存备用；

3)多批次连续发酵：将包埋固定化后的红曲霉菌孢子悬浮液进行发酵罐分批发酵；

4)分离纯化：将发酵后的发酵液经过大孔吸附树脂将红曲色素分离纯化。

5.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步骤(1)制备红曲霉菌孢子悬浮液具体为，将权利要求1所述的胞外色素红高产曲霉菌株用马铃薯葡萄糖培养基在30℃条件下培养7d，之后用4层无菌医用纱布过滤发酵液，0.85％生理盐水等体积洗涤两次，0.85％生理盐水调整至孢子数1.0×10⁶个/mL。

6.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步骤(2)包埋固定化具体为，将红曲霉菌孢子悬浮液与已灭菌的质量浓度为3％的海藻酸钠溶液以质量比1:9g/g的比例混合均匀制成海藻酸钠-孢子悬浮液，待气泡消失后逐滴滴入至已灭菌的质量浓度为8％的氯化钙溶液中，制成直径为2～3mm的固定化颗粒，之后继续让固定化颗粒在氯化钙溶液中于4℃条件下浸泡4h，然后滤出固定化颗粒，用生理盐水洗三次，之后将固定化颗粒浸泡在生理盐水中于4℃保存备用。

7.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法，其特征在于，所述步骤(3)多批次连续发酵中，按照接种量为8％～12％的孢子悬浮液制备成固定化颗粒接种。