[发明专利]一种防风多糖脂质体免疫增强剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种防风多糖脂质体免疫增强剂的制备方法，其包括如下操作步骤：1)用离子水浸泡防风，取上清液进行抽滤、浓缩，再加入无水乙醇沉淀，沉淀物经大孔树脂纯化后真空冷冻干燥，得防风多糖；2)将大豆卵磷脂和胆固醇溶于氯仿，形成一层半透明的淡黄色脂质薄膜，加入乙醚溶解，在加入步骤1)所得的防风多糖和磷酸盐缓冲溶液，后经超声处理至乙醚挥发完全，得成品。本发明通过调整防风多糖脂质体的制备方法，有效提高了防风多糖的纯度和口服生物利用率，同时使其具有细胞穿透力强、易降解、稳定性好等优点，适用于作为禽流感疫苗的免疫增强剂，有效缓解禽流感疫苗的应激反应和弥补禽流感疫苗的免疫空白期。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及一种免疫增强剂的制备方法。

背景技术

目前，市场上使用的禽流感疫苗大多为油乳剂灭活苗，其安全性好,不会出现毒力返强和变异的危险，能够经受同种亚型AIV的攻击，给免疫家禽群提供良好的免疫保护，但机体注射这种疫苗会产生强烈的应激反应。且灭活疫苗需要多次免疫才能够剌激机体产生保护性免疫，只接种一剂产生的保护性有限。另一方面，禽流感免疫空白期长，期间缺乏有效的免疫保护。

近代药理学研究结果表明，防风多糖在调节免疫、抗应激、抗病毒以及抗疲劳等方面发挥着重要作用。但目前传统的中药多糖制剂存在着对细胞穿透力弱、易被降解、口服生物利用度低以及稳定性差等缺陷。脂质体是由磷脂和胆固醇组成的，具有类似生物膜双分子层结构的超微球型载体，无害无毒、具有靶向释药、缓释以及生物组织相容性等优点。所以脂质体有望能够弥补玉屏风多糖的缺点。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种防风多糖脂质体免疫剂的制备方法。

本发明所采取的技术方案是：一种防风多糖脂质体免疫增强剂的制备方法，其包括如下操作步骤：

1)用离子水浸泡防风0.5～1.5h，经超声处理，纱布过滤后沉淀完全，取上清液进行抽滤、浓缩，再加入无水乙醇沉淀10～15h，沉淀物经大孔树脂纯化后真空冷冻干燥，得防风多糖；

2)将3～5:1的大豆卵磷脂和胆固醇溶于氯仿，经减压旋转蒸发使容器内壁形成一层半透明的淡黄色脂质薄膜，加入乙醚溶解，在加入步骤1)所得的防风多糖和磷酸盐缓冲溶液，充分混匀得混合溶液，后经超声处理60～120s至乙醚挥发完全，得乳白色的成品。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述离子水与防风的添加量按质量份计为(8～12):1。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述超声处理为置于80～95℃温度下通过超声机浸提60min并重复3次。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述浓缩为抽滤后滤液体积的1/20。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中乙醚、防风多糖和磷酸盐缓冲溶液的添加量按质量份计为(8～10):15:100。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为10mg/mL。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述混合溶液的pH值为7.4。

本发明的有益效果是：本发明通过调整防风多糖脂质体的制备方法，有效提高了防风多糖的纯度和口服生物利用率，同时使其具有细胞穿透力强、易降解、稳定性好等优点，适用于作为禽流感疫苗的免疫增强剂，有效缓解禽流感疫苗的应激反应和弥补禽流感疫苗的免疫空白期。

具体实施方式