[发明专利]一种快速检测猫细小病毒(FPV)的RDA方法及试剂盒

说明书

本发明公开一种快速检测猫细小病毒（Feline panleukopenia virus，FPV）的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物对以及RDA荧光标记探针，以实现对猫细小病毒（FPV）的安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。本发明中提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，在恒温条件下20min内实现猫细小病毒（FPV）的检测，特异性为100％，与普通PCR方法相比，RDA荧光法在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短，适用于现场快速检测。本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，可为猫细小病毒（FPV）现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种基于RDA荧光法检测技术检测猫细小病毒（Feline panleukopenia virus，FPV）核酸的引物对、探针及相关试剂盒。

背景技术

猫细小病毒（Feline panleukopenia virus，FPV）又称猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性肠炎病毒或猫瘟病毒。FPV属细小病毒科，细小病毒亚科，牛犬细小病毒属成员，是单股无囊膜的NDA病毒。FPV主要感染猫科和鼬科等多种动物，是目前肉食兽细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒。猫泛白细胞减少症是一种急性、高度接触性传染病。猫感染FPV后临床主要以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征。感染率达70%，死亡率一般为50%～60%。此病存在于世界各地，中国的安徽、山东、河南、河北、浙江、湖北、四川、陕西、山西、广西等地均有本病发生，对猫及猫科动物危害极大。因此，建立一种快速、准确、特异和灵敏的检测方法势在必行。

由于猫可较好的耐受麻醉和一般手术，具有手术时能保持正常血压等特殊的生理学特性，因此近年来不仅作为宠物，作为实验动物在医学、生物学等研究领域的应用也越来越广泛，越来越多的被用于形觉波剥夺性弱视、食管病等研究，在降压实验中作为弱视动物模型及高眼压动物模型等，具有不可替代的作用。尤其是在药品的降压物质检查中，猫作为中国药典规定的实验动物。但是，目前在实验动物国家标准及地方标准中，均没有对实验用猫的质量检测要求及相关规定。本研究旨在建立简单、快速、特异、敏感的FPV PCR检测方法，开展对临床患猫及实验用猫携带FPV核酸的检测。该方法的发明和应用对今后开展实验用猫的检测工作及实验用猫标准化研究具有积极的促进作用，同时通过对猫细小病毒携带情况的检测，为猫质量控制标准的制定提供参考依据。

分子生物学的检测大多基于PCR，检测时需要依赖PCR仪或昂贵的实时定量PCR仪，及其它多种配套设备，需配备专门的PCR实验室和专业操作人员，其成本和应用范围均受到一定限制。随着体外核酸恒温扩增的悄然兴起，传统扩增技术的局限性有所改变，在过去的十年中，使核酸体外扩增变得更加简单和方便的一些等温核酸扩增技术已得到快速发展，如LAMP（环介导核酸扩增技术）、HDA（解旋酶依赖等温核酸扩增技术）等均可在等温条件下扩增DNA。这些技术只需要温度控制装置来保持一个恒定反应温度，就可以实现高效的核酸扩增，从而得以摆脱对精密控制温度变化的PCR仪的依赖。若能在更低的温度条件下，甚至在常温条件下实现核酸的扩增，将进一步使核酸扩增技术简单化，并有利于此类技术更广范围的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有猫细小病毒检测技术的缺陷和不足。研究得到一种猫细小病毒（FPV）RDA荧光法检测试剂盒，实现猫细小病毒（FPV）的快速检测，在检测FPV的整个过程中，从样本处理到结果完成，仅需20-30min，大大缩短了常规的检测时间，提高检测效率。该技术可结合便携式的样本处理技术，不依赖于实验室设备，可采样现场进行检测，对FPV感染等疾病控制具有重要意义。

本发明目的在于，提供优选后的检测猫细小病毒的探针及引物对。

所述探针核苷酸序列如SEQ ID NO .1或SEQ ID NO .2所示。