[发明专利]一种快速检测人腺病毒的RDA方法及试剂盒

说明书

本发明公开一种快速检测人腺病毒的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物对以及RDA荧光标记探针，以实现对人腺病毒（HAdV）进行安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。此方法提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，并在37～42℃恒温条件下、20min内实现人腺病毒的检测，特异性为100％，非常适用于现场快速检测。与普通PCR方法相比，RDA荧光法是在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短。因此，本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，为人腺病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种基于RDA荧光法检测技术检测人腺病毒核酸的引物对、探针及相关试剂盒。

背景技术

人腺病毒(Human Adenovirus，HAdV)是一类主要感染人类呼吸道、消化道、泌尿生殖道的病原体,在自然界分布广泛,型别众多。腺病毒属于腺病毒科 (Adenoviridae)的哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)，为DNA病毒，共分为A-G 7个亚组，目前已经鉴定的有67个不同的型别。通过飞沫空气传播是腺病毒主要的传播途径，另外可通过粪口传播和接触传播。有三分之一的腺病毒与人类疾病相关，主要感染人类呼吸道和消化道，其中1、2、3、4、6、7、8、11、14、21、37、40和41型腺病毒等容易引起急性呼吸道疾病、流行性眼角膜结膜炎(红眼病)、急性咽结膜炎、婴幼儿致死性肺炎、胃肠炎等。人腺病毒可造成区域性流行或暴发流行，但由于其感染的临床表现通常无特异性，目前尚无特异性治疗方法，一旦发展为重症肺炎，则致死率较高。其中3型和7型传染性强，在人群聚集地一旦发生易引起群体性感染和爆发流行，是引起儿童呼吸道腺病毒感染最常见的型别。人腺病毒引起的疾病如急性呼吸道疾病、小儿腹泻和咽结合膜热等，在流行早期，传染性强，流行强度大，传播范围广，同时由于广大群众对该病认识不足，防护意识较差，患者出现问题往往会选择基层社区诊疗机构进行治疗，由于现存腺病毒检测方法的不足，往往导致诊断的不及时和常规抗生素的滥用。

传统的腺病毒核酸检测方法大多基于PCR，检测时需要依赖PCR仪或昂贵的实时定量PCR仪，需要多个操作过程，包括病毒的裂解，病毒DNA提取和分子检测，整个过程通常集中在实验室的内进行，需要精密的仪器和熟练的操作人员。然而这些条件在基层社区诊疗机构往往难以获得，严重影响了腺病毒的早期发现和预防。目前仍然缺乏适合基层检验的简单便宜自动化程度高的腺病毒检测试剂盒。

随着体外核酸恒温扩增的悄然兴起，传统扩增技术的局限性有所改变，在过去的十年中，使核酸体外扩增变得更加简单和方便的一些等温核酸扩增技术已得到快速发展，如LAMP（环介导核酸扩增技术）、HDA（解旋酶依赖等温核酸扩增技术）等均可在等温条件下扩增病毒核酸。这些技术只需要温度控制装置来保持一个恒定反应温度，就可以实现高效的核酸扩增，从而得以摆脱对精密控制温度变化的 PCR 仪的依赖。若能在常温条件下实现核酸的扩增，将进一步使核酸扩增技术简单化，并有利于此类技术更广范围的应用。及时准确地发现传染病疫情对于疾病的防治和疫情的控制具有重要意义，因此研究和开发一种能在基层诊疗机构使用，在常温下快速检测核酸的试剂盒非常有必要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有人腺病毒检测技术的缺陷和不足。研究得到一种人腺病毒（HAdV）RDA荧光法检测试剂盒，实现人腺病毒的快速检测，在检测HAdV的整个过程中，从样本处理到结果完成，仅需20-30min，大大缩短了常规的检测时间，提高检测效率。

本发明目的在于，提供优选后的检测人腺病毒的探针及引物对。

所述探针核苷酸序列如SEQ ID NO .1或SEQ ID NO .2所示。